ProduÃÃo e purificaÃÃo parcial de IgY anti-lectina de sementes de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras

• Main Author: Cornevile Correia Neto
• Other Authors: Benildo Sousa Cavada
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2015
• Subjects: ConBr; Igy; Lectinas; Imunoglobulinas; Lectin; Immunoglobulins; OUTROS
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=16386

nÃo hà === Lectins are a group of proteins present in various living organisms, particularly in plants and especially in Leguminosae seeds. Among this family, a species that stands out for having large amount of lectin in the seed is the Canavalia brasiliensis. One approach for the investigation of lectins on biological systems is the detection there of by techniques involving antibody. Such techniques may include from classical immunochemical assays (immunodiffusion, immunoelectrophoresis and rocketimunoeletroforese) to ELISA experiments and advanced microscopy techniques. In this sense, antibodies become biotechnological tools invaluable since they are capable of specifically recognizing epitopes of the target molecules. Immunoglobulins (Igs) are proteins present in high concentration in the blood plasma of mammals. They are vectors of humoral immunity, with the primary function to join the foreign antigens to the individual so as to neutralize them. In the case of poultry the main immunoglobulin class (IgYs) can be found not only in blood, but also in egg yolk. This fact enables fast and efficient purification of these molecules facilitating its use as biotechnological inputs. Thus, this study aimed to produce antibodies against the lectin extracted from Canavalia brasiliensis seed (ConBr) (Fabaceae) in laying hens, implementing production methodology of new biotechnological inputs for the study of lectins. For this laying hens were immunized with 200 or 400μg of lectin Canavalia brasiliensis (ConBr) for 15 weeks at 10-day intervals. Collected eggs from vaccinated birds had their isolated and precipitated yolk in 0-30% fraction with ammonium sulfate for partial purificaÃÃoo of IgYs. Confirmation of the presence of antibodies was made by immunodiffusion assays agarose gel. The fraction showed 0-30%, from the first week after the immunization, capable of recognizing ConBr IgYs. This profile appeared in all groups over the 15-week experiment. The production of specific IgYs against the lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) proved feasible and remained throughout the experiment, possibly in reasonable quantities. In this sense, IgYs produced in this work provide a powerful biotechnological tool to be made available for future studies. === As lectinas constituem um grupo de proteÃnas presentes em diversos organismos vivos, sobretudo em vegetais e especialmente em sementes de Leguminosae. Dentre essa famÃlia, uma espÃcie que se destaca por possuir grande quantidade de lectina na semente à a Canavalia brasiliensis. Uma das possÃveis abordagens para a investigaÃÃo de lectinas em sistemas biolÃgicos à a detecÃÃo das mesmas atravÃs de tÃcnicas que envolvam anticorpos. Tais tÃcnicas podem incluir desde ensaios clÃssicos de imunoquÃmica (imunodifusÃo, imunoeletroforese e rocketimunoeletroforese), atà experimentos de ELISA e tÃcnicas avanÃadas de microscopia. Neste sentido, os anticopos tornam-se ferramentas biotecnolÃgicas de grande valia uma vez que sÃo capazes de reconhecer especificamente epÃtopos das molÃculas alvo. As imunoglobulinas (Igs) são proteínas presentes em grande concentração no plasma sanguÃneo de mamÃferos. São os vetores da imunidade humoral, tendo como função principal unir-se aos antígenos estranhos ao indivÃduo, de modo a neutralizá-los. No caso das aves a principal classe de imunoglobulinas (IgYs) pode ser encontrada nÃo somente no sangue mas tambÃm nas gemas dos ovos. Esse fato permite purificaÃÃo rÃpida e eficiente dessas molÃculas facilitando seu uso como insumos biotecnolÃgicos. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo produzir anticorpos contra a lectina extraÃda da semente de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras, implementando metodologia de produÃÃo de novos insumos biotecnolÃgicos para o estudo de lectinas. Para tanto galinhas poedeiras foram imunizadas com 200 ou 400μg da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) por 15 semanas em intervalos de 10 dias. Ovos coletados das aves imunizadas tiveram suas gemas isoladas e precipitadas na fraÃÃo 0-30% com sulfato de amÃnio para a purificaÃÃo parcial das IgYs. A confirmaÃÃo da presenÃa dos anticorpos foi feita por ensaios de imunodifusÃo em gel de agarose. A fraÃÃo 0-30% apresentou, a partir da primeira semana apÃs a imunizaÃÃo, as IgYs capazes de reconhecer ConBr. Esse perfil se apresentou em todos os grupos ao longo das 15 semanas de experimento. A produÃÃo das IgYs especÃficas contra a lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) se mostrou viÃvel e permaneceu durante todo experimento, possivelmente em quantidades razoÃveis. Neste sentido, as IgYs produzidas nesse trabalho constituem uma potente ferramenta biotecnolÃgica a ser disponibilizada para estudos futuros.