| Summary: | CORDEIRO, Rossana de Aguiar. Estratégias para o conhecimento da coccidioidomicose : uma doença emergente no nordeste brasileiro. 2006. 109 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2006 === Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-06T15:52:40Z
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Previous issue date: 2006 === Coccidiodomycosis is a systemic infection caused by the dimorphic fungi species Coccidioides immitis and C. posadasii. The disease affects both humans and animals, and is considered endemic in the semiarid areas of Ceará State (Northeast Brazil), where it is caused by C. posadasii. The aims of this study were to analyse the phenotypical characteristics of C. posadasii and to develop culture independent methods for improving of the laboratorial diagnosis of coccidioidomycosis. The phenotypical study was conducted with 10 strains (7 from clinical and 3 from ambiental sources) by macro and micromorphology analyses; in vitro growth under different conditions of salinity, temperature and pH; nutritional analysis and antimicrobial susceptibility tests. In addition, methods of antigens extraction and amplification of C. posadasii DNA directly in sputum were also tested. The mycological analysis showed three morphological variations of C. posadasii strains cultivated in potato agar, Sabouraud agar and YEG agar. Regarding to micromorphology, it was observed that arthroconidia counts were related to colony aging and texture. Growth rates of C. posadasii strains were inhibited by high salt concentrations, temperatures above 40° C, but were not affected by the range of pH. Nutritional analyses showed that several compounds, including the oxidized ions, nitrite and nitrate, were efficiently metabolized by C. posadasii strains as carbon and/ or nitrogen sources. The antifungal susceptibility analysis showed that all of the strains of C. posadasii were sensitive to amphotericin B, caspofungin and the azoles ketoconazole, itraconazole, fluconazole, and voriconazole. With the exception of pyrazinamide, all of the tested drugs interfered with the in vitro growth of C. posadasii. Combined antituberculosis drugs also inhibit fungal growth in vitro. Experimental protocols produced a stable and immunoreactive antigen, suitable in presumptive serologic tests for the diagnosis of coccidioidomycosis. Molecular identification of C. posadasii was achieved by PCR amplification of the specific pra gene directly from filamentous cultures and sputum with fungal parasitic structures. The data obtained by phenotypical analyses may be useful in future studies for biological distinction of C. immitis and C. posadasii species. The results of this study provided approaches for a better understanding of coccidioidomycosis in Brazil === A coccidioidomicose é uma infecção sistêmica causada pelos fungos dimórficos Coccidioides immitis e C. posadasii. A doença acomete o homem e uma grande variedade de animais, sendo endêmica no Estado do Ceará, onde é causada pela espécie C. posadasii. O presente estudo buscou analisar as características fenotípicas de C. posadasii e desenvolver métodos independentes de cultivo para o diagnóstico laboratorial da coccidioidomicose. O estudo fenotípico de 10 cepas (7 isolados clínicos e 3 isolados ambientais) foi conduzido por análises macro e micromorfológica, análise da cinética de crescimento frente a estresse salino, térmico e de pH; testes de assimilação de fontes de carbono e nitrogênio e determinação do perfil de sensibilidade frente a antimicrobianos. Adicionalmente, foram avaliados métodos de extração de antígenos de cepas locais de C. posadasii e amplificação de seqüências genéticas exclusivas do fungo em escarro. Foram observadas três variações morfológicas das cepas de C. posadasii cultivadas em ágar batata, ágar Sabouraud dextrose a 2% e ágar YEG. Com relação a micromorfologia, foi detectado que a quantificação de artroconídios estava relacionada à idade e a morfologia das colônias. A avaliação da cinética de crescimento das cepas, in vitro, revelou que as cepas de C. posadasii são inibidas por elevada concentração salina e temperaturas acima de 40 C, mas não sofrem influência quanto à variação de pH do meio. A análise nutricional demonstrou que vários compostos, inclusive os íons oxidados nitrito e nitrato, podem ser utilizados como fontes de carbono e/ou nitrogênio. Todas as cepas de C. posadasii foram sensíveis às drogas antifúngicas anfotericina B, caspofungina e aos derivados azólicos cetononazol, itraconazol, fluconazol e voriconazol. Foi observado que, a exceção da pirazinamida, todos as demais drogas antituberculose alteraram o crescimento das cepas de C. posadasii in vitro. Combinações formadas pelos quimioterápicos antituberculose também mostraram efeito inibitório sobre o crescimento das cepas. Os protocolos experimentais culminaram com uma preparação antigênica estável e imunoreativa, adequada para utilização em testes sorológicos presuntivos para diagnóstico da coccidioidomicose. A identificação molecular de C. posadasii foi realizada, com sucesso, a partir da amplificação da seqüência do gene pra diretamente de culturas filamentosas e escarro contendo estruturas parasitárias do fungo. Acredita-se que as características fenotípicas descritas para as cepas de C. posadasii poderão auxiliar estudos futuros que objetivem a individualização biológica das espécies C. immitis e C. posadasii. Os resultados desse estudo contribuíram para o estabelecimento de estratégias para o maior conhecimento da coccidioidomicose no Brasil
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