Isolamento de plastídios do endosperma de sementes em desenvolvimento de pinhão manso (Jatropha curcas L.)

• Main Author: Pinheiro, Camila Barbosa
• Other Authors: Campos, Francisco de Assis de Paiva
• Language: Portuguese
• Published: 2015
• Subjects: Bioquímica; Histoquímica; Pinhão-manso; Jatropha curcas; Eletroforese; Plastídios
• Online Access: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/10463

PINHEIRO, C. B. Isolamento de plastídios do endosperma de sementes em desenvolvimento de pinhão manso (Jatropha curcas L.). 2010. 103 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. === Submitted by Francisco Lacerda ([e-mail]) on 2014-10-31T19:24:09Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_cbpinheiro.pdf: 4619196 bytes, checksum: 9c3f62aee9c581ca0c832ec34ef6dab5 (MD5) === Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa([e-mail]) on 2015-01-16T17:02:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_cbpinheiro.pdf: 4619196 bytes, checksum: 9c3f62aee9c581ca0c832ec34ef6dab5 (MD5) === Made available in DSpace on 2015-01-16T17:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_cbpinheiro.pdf: 4619196 bytes, checksum: 9c3f62aee9c581ca0c832ec34ef6dab5 (MD5) Previous issue date: 2010 === Jatropha (Jatropha curcas L.), belonging to the Euphorbiaceae family, is an oilseed plant with great potential for biofuel production because of the richness of lipids in their seeds. It also presents toxicity due to the presence of phorbol esters. In this context, the objective of this study is the isolation of plastids, the site of synthesis of fatty acids and phorbol esters, present in the endosperm of developing seeds of J. curcas. Preliminary experiments by testing morphology, histology and histochemistry was performed to determine the stage of seed development most suitable for the isolation of plastids present in the endosperm. These analyzes revealed that the deposition of lipids and proteins in the endosperm starts around the 30th DAA. The isolation of plastids, the endosperm of the seeds in this stage was performed by gradient centrifugation PBF-Percoll discontinuous (10%, 22%, 35%). The enriched fractions of plastids has been obtained from the band formed in the interface layer of 22-35%. Analysis by scanning electron microscopy and transmission were performed to confirm the efficiency of the protocol employed in the purification of the plastids. Two-dimensional maps have been laid, the "spots" detected in the same will be identified by mass spectrometry, which will allow the identification of the plastid proteins involved in the synthesis of fatty acids and phorbol esters in the endosperm of seeds J. curcas. === O pinhão manso (Jatropha curcas L.), pertencente à família Euphorbiaceae, é uma planta oleaginosa com grande potencial para a produção de biocombustível devido à riqueza de lipídios em suas sementes. Ele também apresenta toxicidade devido à presença de ésteres de forbol. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é realizar o isolamento de plastídios, local de síntese de ácidos graxos e de ésteres de forbol, presentes no endosperma de sementes em desenvolvimento de J. curcas. Experimentos preliminares através de análises morfológica, histológica e histoquímica foram realizados para determinação do estágio do desenvolvimento da semente mais adequado para o isolamento de plastídios presentes no endosperma. Estas análises revelaram que a deposição de lipídios e proteínas no endosperma se inicia por volta do 30o DAA. O isolamento de plastídios, do endosperma de sementes nesse estágio foi realizado por centrifugação em gradiente descontínuo de PBF-Percoll (10%, 22%, 35%). A fração enriquecida de plastídios foi obtida a partir da banda formada na interface da camada de 22-35%. Análises por microscopia eletrônica de varredura e de transmissão foram realizadas para confirmar a eficiência do protocolo empregado na purificação dos plastídios. Mapas bidimensionais foram estabelecidos, os “spots” detectados nos mesmos serão identificados por espectrometria de massa, o que possibilitará a identificação das proteínas plastidiais envolvidas na síntese dos ácidos graxos e dos ésteres de forbol no endosperma de sementes de J. curcas.