Caracterização genética da região controladora do mtDNA e de loci de microssatélites das subpopulações de tursiops truncatus(cetacea, delphinidae) do complexo lagunar de Santo Antônio dos Anjos, Santa Catarina, e litoral norte do Rio Grande do Sul

• Main Author: Costa, Ana Paula Borges de Camargo
• Other Authors: http://lattes.cnpq.br/0352640252677539
• Language: Portuguese
• Published: Universidade do Vale do Rio dos Sinos 2015
• Subjects: ACCNPQ::Ciências Biológicas::Biologia Geral; DNA difícil; Museus; Boto-da-Tainha; Brasil; Difficult DNA; Museums; Bottlenose dolphins; Brazil
• Online Access: http://www.repositorio.jesuita.org.br/handle/UNISINOS/3875

Submitted by William Justo Figueiro (williamjf) on 2015-06-15T23:23:28Z No. of bitstreams: 1 18.pdf: 1003465 bytes, checksum: 4ec0188cddd4cd7f3d6c8b0b4e08a5b0 (MD5) === Made available in DSpace on 2015-06-15T23:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 18.pdf: 1003465 bytes, checksum: 4ec0188cddd4cd7f3d6c8b0b4e08a5b0 (MD5) Previous issue date: 2013-02 === Nenhuma === Espécimes depositados em coleções científicas são uma importante fonte de DNA para identificações taxonômicas e estudos de genética de populações. Isso é especialmente verdadeiro para as espécies raras, as quais têm um grande valor científico em função do seu pequeno tamanho amostral em museus. Além disso, muitas vezes, o acesso às coleções para a realização de estudos moleculares sobre estes táxons só é possível através do uso de técnicas de extração de DNA não-invasivas. Um método alternativo que evita a destruição das amostras de museus e de extração eficiente é apresentado no presente trabalho para quatro exemplares de boto-da-tainha (Tursiops truncatus) coletados ao longo da costa de Santa Catarina, Brasil, entre os anos de 1985 e 2007. Com o auxílio de uma furadeira (modelo Bosch GSR 14,4-2) com brocas de cerca de 2 mm foram feitos pequenos furos em dentes de espécimes fisicamente adultos de Tursiops truncatus da coleção do Laboratório de Mamíferos Aquáticos da Universidade Federal de Santa Catarina (LAMAQ/UFSC). Foram retirados entre 100-150 mg de pó de dentina/cemento e desmineralizados por 7 dias à 55º C com 950 µl de EDTA (0,5 M; pH 8). Este material foi incubado à 55º C overnight para que as células sofressem digestão de proteínas e RNA pela ação de 300 µl de Tampão ATL, 20 µl de Proteinase K e 1 µl de RNAse. A etapa final foi concluída pelo kit de extração Qiagen DNA Investigator (QIAGEN®). A eficiência do DNA extraído foi testada através da amplificação de um fragmento de no mínimo 362 pares de base (pb) da região controladora do DNA mitocondrial em quatro espécimes de T. truncatus. Um total de dois haplótipos com 11 sítios polimórficos foram encontrados. O alto polimorfismo observado é uma possível decorrência da grande variabilidade genética do gênero Tursiops. Em casos onde existe a hipótese de subespécies baseada em caracteres morfológicos, a identificação molecular pode ajudar a atribuir os espécimes de museus a cada ecótipo, sendo de extrema importância o uso de métodos de extração eficientes e não-invasivos, como o demonstrado aqui, para a obtenção de resultados satisfatórios e preservação dos exemplares. === Museum specimens are an important source of DNA for taxonomic identifications and population genetics studies. This is especially true for rare species, which has great scientific value due to its small sample size in museums. Moreover, often, access to collections for performing molecular studies on these taxa is only possible through the use of nondestructive DNA extraction techniques. An alternative method, which avoids the destruction of museum samples and with an efficient DNA extraction is presented here for four bottlenose dolphins (Tursiops truncatus) specimens collected along the coast of Santa Catarina, Brazil, from 1985 to 2007. This is the first study in Brazil to amplify teeth DNA of T. truncatus for the mtDNA control region. Using a drill (Bosch GSR 14.4-2 model) with drill bits of about 2 mm, small holes were made in teeth of specimens of Tursiops truncatus physically adults deposited in the collection of the Laboratório de Mamíferos Aquáticos, Universidade Federal de Santa Catarina (LAMAQ/UFSC). Between 100-150 mg of powdered dentin/cementum were removed and demineralized for 7 days at 55° C with 950 µl of EDTA (0.5 M, pH 8). This material was incubated at 55° C overnight to the cells suffer digestion of proteins and RNA by the action of 300 µl of Buffer ATL, 20 µl Proteinase K and 1 µl of RNAse. The final step was completed by the extraction kit Qiagen DNA Investigator (QIAGEN®). The efficiency of the extracted DNA was tested by amplification of a fragment of at least 362 base pairs (bp) of the mitochondrial DNA control region in four specimens of T. truncatus. A total of two haplotypes were defined from 11 polymorphic sites. The high polymorphism detected is a possible consequence of the great genetic variability of the genus Tursiops. In cases where there is the subspecies hypothesis based on morphological data, molecular identification can help to assign these museum specimens to each ecotypes, being extremely important the use of efficient and nondestructive extraction methods, as showed here, to obtain satisfactory results and to conserve the specimens.