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Previous issue date: 2012-10-26 === CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === A bactéria Bacillus thuringiensis exibe alta atividade tóxica específica para insetos devido à sintese de delta-endotoxinas, codificadas por genes cry. A presente pesquisa visou avaliar a atividade tóxica de cepas de Bacillus thuringiensis oriundas de regiões orizícolas do Estado do Rio Grande do Sul, como agente de controle de insetos-praga da cultura do arroz irrigado e milho Spodoptera frugiperda e Ostrinia nubilalis, a fim de selecionar cepas potenciais para o controle das mesmas e identificar se as atividades enzimáticas dos receptores alcalino fosfatase (ALP) e aminopeptidase (APN) podem ter um importante papel na resistência de B. thuringiensis. Neste trabalho foram utilizados testes fenotípicos e técnicas de PCR para a identificação das subclasses do gene cry1; perfil de proteínas para a observação da composição do complexo esporo-cristal, rep-PCR para a observação da variabilidade genética, DNA plasmidial, quantificação das enzimas ALP e APN para se observer perfil de resistência das cepas e a atividade tóxica frente aos insetos-praga. Os ensaios de quantificação de proteínas de ALP e APN apresentaram níveis reduzidos, sendo um biomarcador potencial para a resistência de toxinas Cry. Os resultados dos estudos de rep-PCR demonstraram um elevado grau de similaridade entre as regiões orizícolas, provavelmente associadas à especiação ecológica. Na caracterização do perfil protéico, os resultados revelaram diferenças entre as cepas em estudo, sendo algumas semelhantes àquelas utilizadas como padrão da análise (Bt. thuringiensis 4412; Bti IPS 82 e Bt. sorovar HD1). Nos ensaios do perfil plasmidial, as cepas formaram três padrões distintos. Para os dados de toxicidades avaliados pelos bioensaios com as lagartas de primeiro ínstar de O. nubilalis, todas as cepas testadas apresentaram mortalidade superior a 75%, com destaque à cepa Bt.1893-15 que causou 95%. Nos dados dos ensaios biológicos realizados contra as lagartas de S. frugiperda, a cepa Bt. 3420-11 destacou-se com mortalidade superior a 88%. === The bacterium Bacillus thuringiensis presents a high specific activity against insects
due to delta-endotoxin syntheses, codified by cry genes. This study aimed to
evaluate the toxic activity of strains of B. thuringiensis derived from rice fields of Rio
Grande do Sul, as an agent of control of insect pest of rice and corn Spodoptera
frugiperda and Ostrinia nubilalis, in order to select potential strains to control and
identify whether the enzymatic activity of alkaline-phosphatase (ALP) and
aminopeptidase (APN) receptors may play an important role in the resistance of
B. thuringiensis. In this study we used phenotypic tests and PCR techniques to identify
subclasses of gene cry1; proteins profile to observe the composition of the spore-
crystal complex, rep-PCR for the observation of genetic variability, plasmid DNA,
quantification of the enzymes ALP and APN to observe resistance profile of strains
and bioassay capacity against insect pests. Assays for quantification of proteins ALP
and APN showed reduced levels being a potential biomarker for resistance to Cry
toxins. The results of studies of rep-PCR demonstrated a high degree of similarity
between the rice regions, probably associated with ecological speciation. Regarding
the protein profile characterization, the results revealed differences between the
strains, some being similar to those used as standard analysis (Bt thuringiensis
4412, Bt IPS 82 and Bt HD1). In trials of plasmid profile, the strains formed three distinct patterns. In data and toxicity assessed by bioassays against first instar
O. nubilalis larvae, all tested strains showed mortality exceeding 75%, highlighting the Bt strain 1893-15, which caused 95% mortality. In the data of the biological assays conducted against S. frugiperda larvae, the Bt strain 3420-11 stood out showing mortality greater than 88%.
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