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Previous issue date: 2008 === Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2008 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde === A quantidade de bacilos viáveis presentes na vacina BCG é um importante requisito de qualidade deste produto, pois permite avaliar a consistência de produção. A contagem de colônias em meio sólido é o método oficial recomendado pela Organização Mundial da Saúde e pela Farmacopéia Brasileira para a determinação da viabilidade do BCG. A difícil dispersão do BCG e seu crescimento lento conferem limitações ao método oficial, como a variabilidade dos resultados, a baixa reprodutibilidade e o prolongado tempo de análise. Este trabalho avaliou a aplicabilidade da técnica de redução do sal de tetrazol XTT como método alternativo para a determinação do número de viáveis em vacinas produzidas com o BCG Moreau-RJ. Foi demonstrada a linearidade das técnicas de redução do XTT realizadas com base em Kairo et al. (1999) e em Argüelles et al (2005) em 3, 24 e 48 horas de incubação. Os ajustes lineares foram obtidos pela técnica de redução do XTT a 1 mg/mL baseada em Kairo et al. (1999), com coeficiente de determinação (RP2P=0,99), em conformidade com a Resolução N. 899/2003 da ANVISA referente à validação de métodos bioanalíticos. O melhor ajuste abrangeu as concentrações de vacina de 2,0 a 16,0 x 10P6 PUFC/mL após 24 e 48 horas de incubação a 37C. Nestas condições de ensaio os números de viáveis obtidos preliminarmente para cinco lotes de vacina BCG intradérmica empregados na rotina de imunização do país e para três amostras da vacina de referência BRABCG003 foram fortemente correlacionados (r=0,96) àqueles fornecidos pelo método tradicional de cultivo em meio de Lowenstein-Jensen. Com base nos valores de referência preconizados pela Farmacopéia Brasileira, observou-se 100 por cento de concordância na interpretação final dos resultados fornecidos pelos dois métodos para os cinco lotes de vacina avaliados. === The number of culturable particles in the BCG vaccine is an important requirement of quality control, therefore it allows to evaluate the production consistency. The colony counting on solid medium is the official method recommended by the World Health Organization and by the Brazilian Pharmacopeia to determine the viability of the BCG on final lots. The nature of the organism (difficult dispersion and slow growth) confers inter-laboratory variation of results and time consuming characteristics to the current test. The present work evaluated the applicability of the reduction of the salt of tetrazol XTT as an alternative method to determine the number of viable units in vaccines produced with the BCG Moreau-RJ. The method was linear by the techniques of reduction of the XTT based on Kairo et. (1999) and on Argüelles (2005) after 3, 24 and 48 hours of incubation. The linear adjustment was obtained by assays of reduction of XTT at 1 mg/mL based on Kairo et al. (1999), with coefficient of determination (RP2P=0,99) required by the Resolution N° 899/2003 / ANVISA concernem to the validation of bioanalitical assays. Optimal calibration curves enclosed vaccine concentrations from 2,0 x 10P6 Pto 16,0 x 10P6 PCFU/mL after 24 and 48 hours of incubation at 37 °C. With these conditions the numbers of viable units obtained from five lots of intradermal vaccines used in the brazilian routine of immunization and from three samples of the reference vaccine BRABCG003 had been strongly correlated (r=0,96) to those provided by the current method of culture in Lowenstein-Jensen. Thus, we observed 100% of agreement between the final interpretations of the two methods of analysis considering the range of values referred by the Brazilian Pharmacopeia to BCG vaccine. Therefore, beyond the strong correlation with the official method, the reduction length of assay from 4 weeks to 48 hours, the relative low cost and the easiness of execution represent strong incentives to the validation of the reduction of XTT as an alternative method to replace the counting of colonies in Lowenstein-Jensen.
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