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Lais da Silva Pereira. Avaliação das histonas...2013.pdf: 2452594 bytes, checksum: 808d7633f6d2684df54ea8b640e282c0 (MD5)
Previous issue date: 2013 === Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil === A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa grave, causada por protozoários intracelulares obrigatórios do gênero Leishmania. Vários antígenos de Leishmania têm sido avaliados como candidatos vacinais, destacando-se as proteínas de histonas (HIS), antígenos altamente conservados. A exposição de HIS pela Leishmania induz uma resposta imune potente no hospedeiro vertebrado. Desse modo, neste estudo, avaliamos, em hamsters, a capacidade imunoprotetora dos antígenos de histonas contra a infecção por Leishmania infantum. Os animais foram vacinados com estratégia homóloga, utilizando-se plasmídeos de DNA que codificam para HIS (pcDNA3LiH2A-H3, pcDNA3LiH2B-H4) ou heteróloga (DNA/proteínas HIS) mais 1nM de CpG. Quinze dias após a última imunização, os animais foram desafiados pela via intradérmica com 105 Leishmania infantum metacíclicas mais 0,5 par de glândula salivar de Lutzomya longipalpis. Após a última imunização e durante a infecção, realizaram-se dosagens de citocinas por PCR em tempo real (linfonodo e baço), sorologia por ELISA (soro), carga parasitária por diluição limitante e análise histopatológica de tecidos (linfonodo, baço e fígado). Detectou-se produção de anticorpos IgG anti HIS nos grupos imunizados com a estratégia homóloga e heteróloga, quando comparados aos hamsters não imunizados. As imunizações homóloga e heteróloga diferiram na razão IFN-γ/IL-10 no linfonodo em relação ao grupo controle. Não houve diferença significativa na expressão dessas citocinas no baço após a imunização, entretanto, cinco meses após o desafio o grupo homólogo apresentou um aumento na produção de IL-10 nesse órgão. Na análise histopatológica do baço, verificou-se formação de mais folículos com centro germinativo, evidentes nos animais imunizados independentemente do grupo analisado. Observou-se, também, leucocitose intrasinusoidal e periportal no fígado, e folículos reativos no linfonodo. Nenhuma das estratégias de imunizações com antígenos de histonas acarretou em diminuição da carga parasitária no linfonodo, baço e fígado. As estratégias de imunização homóloga e heteróloga, com antígenos de histonas nucleossomais, não foram capazes de proteger contra infecção por L. infantum no modelo do hamster. === Visceral leishmaniasis is a serious infectious disease caused by obligatory intracellular
protozoan of the Leishmania genus. Many antigens from Leishmania have been evaluated as
vaccine candidates mainly the histones (HIS) that are highly conserved. Exposure to HIS from
Leishmania elicits a strong host immune response in the vertebrate host. Threfore, in this
study, we evaluated the immunoprotective ability of HIS antigens against infection by
Leishmania infantum in hamsters. The animals were immunized with homologous strategy
using plasmid of the DNA coding for HIS (pcDNA3LiH2A-H3, pcDNA3LiH2B-H4) or
heterologous strategy using DNA and recombinant protein plus CpG. Fifteen days after last
immunization, the animals were challenged by the intradermal route with 105Leishmania
infantum metacyclics plus 0,5 pair of Lutzomya longipalpis salivary gland. After the last
immunization and in the course of the infection, we determined cytokine production by Real
time PCR (lymph node and spleen), serology by ELISA (sera), parasite burden was estimated
by limiting dilution assay and histopathological analysis (lymph node, spleen and liver).
Production of antibody anti HIS IgG was detected in the immunized groups treated with the
homologous and heterologous strategies when compared to non-immunized hamsters.
Homologous and heterologous immunizations altered the ratio of IFN-γ/IL-10 in the lymph
node compared to the control group. There is not a significant difference in the expression of
this cytokine in the spleen after the immunization, however, five months after the challenge
the homologous group presented a higher expression of IL-10 in this organ. The
histopathological analysis of the spleen showed the formation of high number of follicles with
a germinative center in the immunized animals independently of the immunization employed.
Intrasinusoidal and periportal leukocytosis were observed in the liver and reactive follicles in
the lymph node. Both immunization strategies with histone antigen did not result in reduction
of parasite burden in the lymph node, spleen and liver. Immunization with homologous and
heterologous strategies using histone antigen were not able to confer protection in the hamster
model against L. infantum infection.
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