O Envolvimento das metaloproteinases de matriz na lesão tecidual na hanseníase

• Main Author: Teles, Rosane Magda Brandão
• Other Authors: Britto, Constança Felícia De Paoli de Carvalho
• Language: Portuguese
• Published: 2013
• Subjects: Hanseníase; Lesão Tecidual; Metaloproteinases
• Online Access: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/6310

Submitted by Tatiana Silva ([e-mail]) on 2013-02-15T17:31:59Z No. of bitstreams: 1 rosane_m_b_teles_ioc_bcm_0062_2006.pdf: 5160654 bytes, checksum: b367a20dca7499410e166c2d8679bf26 (MD5) === Made available in DSpace on 2013-02-15T17:31:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rosane_m_b_teles_ioc_bcm_0062_2006.pdf: 5160654 bytes, checksum: b367a20dca7499410e166c2d8679bf26 (MD5) Previous issue date: 2006 === Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil === Metaloproteinases de matriz (MMP) são endopeptidases dependentes de zinco e cálcio que coletivamente são capazes de degradar os componentes da matriz extracelular. MMP-2 e MMP-9 pertencem ao grupo das gelatinases e são capazes de degradar a membrana basal, estando envolvidas na transmigração de células dos vasos sanguíneas para o interstício em processos fisiológicos e patológicos. Logo, estas gelatinases participam da quebra da barreira nervo-sangue e na migração de células inflamatórias para os tecidos, estando envolvidas com a severidade de doenças como, artrite reumatóide, esclerose múltipla e tuberculose. A hanseníase é caracterizada por alterações na pele e nervos periféricos em todas as formas clínicas. Estas alterações também são observadas nos estados agudos de resposta imuno-inflamatórias contra o M. leprae denominados episódios reacionais. Nestes episódios podemos observar uma intensa infiltração de leucócitos na derme o que pode causar lesão em nervos periféricos. O objetivo deste estudo foi analisar a participação de MMP-2 e MMP-9 na inflamação e lesão tecidual na pele e no nervo periférico na hanseníase. Para verificar a expressão de mediadores inflamatórios em amostras de tecido e células, foi realizada a RT-PCR. A atividade de MMPs em sobrenadantes de cultura e em amostras de derme foram analisadas por zimografia. Imunohistoquímica e imunocitoquímica foram realizadas para detectar MMPs no tecido e em células, respectivamente. Além disso, a secreção de MMP-9 e TIMP-1 em sobrenadantes de PBMC foi detectada por ELISA. M. leprae (ML) induziu a expressão de RNAm de MMP-9 em PBMC depois de 6 horas de estímulo, TIMP-1 não foi alterado. TNF induziu altos níveis de MMP-9 em PBMC amplificando a indução pelo ML. A comparação dos níveis de RNAm entre a derme de pacientes multi (MB) e paucibacilares (PB) foi realizada. Um aumento de RNAm de IFN, TNF, MMP-2, MMP-9 em PB foi observada. Os níveis de RNAm de IL-10 e TIMP-1 não foram modificados entre pacientes PB e MB. A comparação da derme antes e durante a reação mostrou um aumento significativo de RNAm de TNF, MMP-2 e MMP-9, os níveis de TIMP-1 não foram alterados. A razão MMP-9/TIMP-1 aumentou na derme durante a reação em comparação com antes da reação. Estudos funcionais da ativação de MMP mostraram que o ML induziu a produção de MMP-9 de acordo com os resultados do ELISA. Altos níveis de MMP-2 e MMP-9 ativas foram detectadas na derme de pacientes reacionais. As biópsias de nervo de pacientes com hanseníase mostraram altos níveis de RNAm de TNF, TACE, MMP-2 e MMP-9. Assim como, foi verificado a presença de TNF, TACE, MMP-2 e MMP-9 no nervo de pacientes com hanseníase por imunohistoquímica. Os níveis de RNAm de MMP-2 e MMP-9 aumentaram em CS estimuladas com ML, os níveis de TIMP-1 não foram alterados pelo ML. Da mesma forma como observado em PBMC, o TNF amplificou os efeitos do ML na expressão de RNAm de MMP-9. Finalmente, MMP-2 e MMP-9 devem estar envolvidas no processo inflamatório na hanseníase, e devem ser críticas para o mecanismo da lesão tecidual em nervos periféricos. === Matrix metalloproteinases (MMP) are zinc and calcium dependent endoproteases that, together, are able to degrade extracellular matrix componentes. MMP-2 and MMP-9 belong to the gelatinase group and are able to degrade the basal membrane, being involved in cell transmigration from blood vessels to intersticy in both physiological and pathological processes. These gelatinases paticipate in the breakdown of the blood-nerve barrier and in the migration of inflammatory cells into tissues, having been associated with disease severity in rheumatoid artritis, multiple sclerosis and tuberculosis. Leprosy is characterized by alterations in skin and peripheral nerves in all clinical forms. These alterations are also observed in the acute state of the immune-inflammatory response against M. leprae called reactional episodes. In these episodes we can observe an intense leukocyte infiltration in the dermis that can cause peripheral nerve lesion. The aim of this study was to analyze the participation of MMP-2 and MMP-9 in the inflammation and tissue lesion in the skin and peripheral nerve. To verify the mRNA expression of inflammatory mediators in cells and tissue samples, RT-PCR was performed. The activity of MMPs in the culture supernatants and in dermal samples was analyzed by zymography. Immunohistochemistry and immunocytochemistry were performed to detect MMPs in cells and tissues. In addition, MMP-9 and TIMP-1 secretion in PBMC supernatants were detected by ELISA. M. leprae (ML) induced MMP-9 mRNA expression in PBMC after 6 hours of stimulation, TIMP-1 was not altered. TNF induces high levels of MMP-9 in PBMC amplifying the ML induction. The comparison of mRNA levels between the dermis of multi- (MB) and paucibacillary (PB) patients was performed. An increase in IFN, TNF, MMP-2 and MMP-9 mRNA levels in PB was observed. IL-10 and TIMP-1 mRNA levels were not modified between PB and MB patients The comparison of dermis before and during reaction showed a significant increase in TNF, MMP-2 and MMP-9 mRNA levels, TIMP-1 was not altered. The ratio MMP-9/TIMP-1 showed an increase in the dermis in reactional states, compared to the dermis before reaction. Functional studies of MMP activation, performed by zymography, suggested that ML induces the production of MMP-9, in accordance with the ELISA results. Higher levels of active MMP-2 and MMP-9 were detected in dermis of reactional patients. Nerve biopsies of leprosy patients showed high levels of TNF, TACE, MMP-2 and MMP-9 mRNA. MMP-2 and MMP-9 mRNA levels were increased in the ML-stimulated SC and ML did not induced TIMP-1. Similar to what was observed with PBMC, TNF amplified the effect of ML in MMP-9 mRNA expression. Finally, MMP-2 and MMP-9 might bearer probably involved in the inflammatory processes in leprosy, and may play a critical role in the mechanism of tissue lesion in peripheral nerves.