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nathalia_p_souza_ioc_bp_0044_2011.pdf: 3450828 bytes, checksum: 39e189593b548a342a469c1a2132d938 (MD5) === Made available in DSpace on 2012-07-23T17:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2011 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. === Os membros da família Trypanosomatidae são parasitos flagelados que podem
infectar vertebrados e ou invertebrados, e de acordo com o tipo e número de
hospedeiros são classificados como parasitas monoxênicos ou heteroxênicos. Neste
trabalho realizamos a comparação da detecção de transcritos entre Trypanosoma
cruzi clone CL-Brener, espécie heteroxênica, e Blastocrithidia culicis, como
representante dos tripanossomatídeos monoxênicos, ambos submetidos a tensões
físicas, químicas e nutricionais.
A questão proposta é se duas espécies de
tripanossomatídeos com estilos de vida distintos respondem à mesma pressão
ambiental (tensão em meio de cultivo) com os mesmos genes. Para tanto foi
realizado o crescimento de ambas as espécies em diferentes condições de tensão,
como alterações de temperatura, variações de pH, redução de nutrientes do meio,
adição de agentes químicos ao meio, entre outros. O perfil dos transcritos, obtidos,
através de RT-PCR com iniciador arbitrário selecionado (RNA fingerprinting), foi
comparado entre a condição padrão de crescimento (controle) e as condições
alteradas entre as duas espécies. Com isso, foram observados comportamentos
distintos dos tripanossomatídeos nas condições físicas impostas, como os extremos
de temperaturas. Com esta abordagem metodológica que deve apontar os genes
que mais respondem as condições de estresse nas células, obtivemos uma
representação do momento transcricional dos protozoários. Foram gerados 722
ESTs após o sequenciamento de fragmentos transcritos de T. cruzi e B. culicis sob
tensão, além de ESTs da condição padrão (controle) de B. culicis. Foi observada
alta transcrição de genes de proteínas de superfície (mucinas, trans-sialidades,
gp63, etc) sob tensão tanto em T. cruzi como B. culicis, além de proteínas
regulatórias da expressão gênica em menor quantidade. Ambas as espécies
apresentaram trans splicing de duas formas diferentes, através da utilização de
sítios adicionais (AG), antes da ORF, ou splicing alternativo ao gerar transcritos
internos às ORFs. Concluímos com isso que tripanossomatídeos de espécies e
estilos de vida distintos compartilham apenas poucos genes quando em condições
de estresse. Grande parte dos transcritos mostraram-se específicos para cada
espécie. === Os membros da família Trypanosomatidae são parasitos flagelados que podem
infectar vertebrados e ou invertebrados, e de acordo com o tipo e número de
hospedeiros são classificados como parasitas monoxênicos ou heteroxênicos. Neste
trabalho realizamos a comparação da detecção de transcritos entre Trypanosoma
cruzi clone CL-Brener, espécie heteroxênica, e Blastocrithidia culicis, como
representante dos tripanossomatídeos monoxênicos, ambos submetidos a tensões
físicas, químicas e nutricionais.
A questão proposta é se duas espécies de
tripanossomatídeos com estilos de vida distintos respondem à mesma pressão
ambiental (tensão em meio de cultivo) com os mesmos genes. Para tanto foi
realizado o crescimento de ambas as espécies em diferentes condições de tensão,
como alterações de temperatura, variações de pH, redução de nutrientes do meio,
adição de agentes químicos ao meio, entre outros. O perfil dos transcritos, obtidos,
através de RT-PCR com iniciador arbitrário selecionado (RNA fingerprinting), foi
comparado entre a condição padrão de crescimento (controle) e as condições
alteradas entre as duas espécies. Com isso, foram observados comportamentos
distintos dos tripanossomatídeos nas condições físicas impostas, como os extremos
de temperaturas. Com esta abordagem metodológica que deve apontar os genes
que mais respondem as condições de estresse nas células, obtivemos uma
representação do momento transcricional dos protozoários. Foram gerados 722
ESTs após o sequenciamento de fragmentos transcritos de T. cruzi e B. culicis sob
tensão, além de ESTs da condição padrão (controle) de B. culicis. Foi observada
alta transcrição de genes de proteínas de superfície (mucinas, trans-sialidades,
gp63, etc) sob tensão tanto em T. cruzi como B. culicis, além de proteínas
regulatórias da expressão gênica em menor quantidade. Ambas as espécies
apresentaram trans splicing de duas formas diferentes, através da utilização de
sítios adicionais (AG), antes da ORF, ou splicing alternativo ao gerar transcritos
internos às ORFs. Concluímos com isso que tripanossomatídeos de espécies e
estilos de vida distintos compartilham apenas poucos genes quando em condições
de estresse. Grande parte dos transcritos mostraram-se específicos para cada
espécie.
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