Participação de subpopulações de linfócitos T na fisiopatologia da hanseníase lepromatosa e na gênese do Erythema Nodosum Leprosum (ENL)

• Main Author: Silva, Pedro Henrique Lopes da
• Other Authors: Cruz, Alda Maria da
• Language: Portuguese
• Published: 2016
• Subjects: Hanseníase Virchowiana; Eritema Nodoso; Linfócitos; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
• Online Access: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/14291

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pedro_silva_ioc_mest_2016.pdf: 1919123 bytes, checksum: 819b6d80dd4622a4af7c53113c7ccc3d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil === O Erythema Nodosum Leprosum (ENL) é um quadro de inflamação aguda súbita que afeta predominantemente pacientes do polo lepromatoso (LL) da hanseníase, podendo ocorrer antes, durante ou após a poliquimioterapia, sendo responsável por grande parte das incapacidades físicas associadas à doença. Não está totalmente esclarecido quais fatores são responsáveis desencadeamento do ENL. Alguns dados mostram que no ENL ocorre aumento da mobilização de neutrófilos para as lesões de pele, ativação de macrófagos e linfócitos T, juntamente com o aumento na secreção dos níveis séricos de TNF e IL-1\F062. Com o intuito de aprofundar os conhecimentos em torno da participação dos linfócitos T na patogênese na hanseníase lepromatosa e do ENL, no presente trabalho realizamos a caracterização ex vivo e in vitro em resposta ao estímulo com M. leprae de subpopulações de linfócitos T obtidas do sangue periférico de pacientes LL com ou sem ENL, bem como a avaliação da ação funcional destas subpopulações mediante a análise da frequência destas células produtoras das citocinas IFN-\F067, TNF e IL-10, por citometria de fluxo multiparamétrica. Ademais, fizemos análise da expressão de genes que codificam os fatores de transcrição críticos para a diferenciação de linfócitos T por meio da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Voluntários sadios de área endêmica para a hanseníase foram incluídos em nosso estudo. Dentre os resultados obtidos, destacamos o aumento significativo na frequência de linfócitos T CD8+ de memória efetora produtores de TNF no grupo de pacientes que apresentou ENL Esse mesmo grupo também apresentou aumento significativo de linfócitos T CD4+ e CD8+ produtores de IL-10, especialmente em resposta ao antígeno. Contudo, esse fato ocorreu apenas nas subpopulações naïve e de memória central. Além disso, o grupo ENL apresentou redução na frequência de linfócitos T CD4+ e CD8+ produtores de IFN-\F067, assim como uma significativa redução na expressão dos fatores de transcrição STAT4 e TBX21. Por fim, observamos uma forte correlação positiva e altamente significativa entre o índice bacilar (IB) dos pacientes com ENL e a frequência de linfócitos T CD4+/TNF+. No mesmo grupo de pacientes, também observamos uma significativa correlação negativa entre o IB e a frequência de células CD4+ produtoras de IL-10. Nossos resultados corroboram outros achados sobre o desequilíbrio da resposta imune na gênese do ENL, e demonstram associação entre o IB e a frequência de células produtoras das citocinas pró-inflamatórias IFN-\F067 e TNF. Em suma, os dados obtidos e discutidos neste trabalho sugerem a contribuição precípua dos linfócitos T de memória, especificamente os CD8+ de memória efetora para a alteração transitória da resposta imune ao M. leprae, característica marcante no ENL === Erythema nodosum leprosum (ENL), a sudden episode of acute inflammation predominantly affecting lepromatous leprosy patients (LL), can occur before, during or after multidrug therapy, accounting for much of the physical disabilities associated with the disease. It is not clear which are the triggering factors for ENL. Some data from ENL patients show an increased migration of neutrophils into skin lesions, activation of macrophages and T lymphocytes, together with an increased secretion of TNF and IL-1\F062 serum levels. For a better understanding on the involvement of T lymphocytes in the pathogenesis in lepromatous leprosy and ENL, this study performed ex vivo and in vitro characterization of T cell subpopulations from blood in response to M. leprae from LL patients with or without ENL, as well as the evaluation of functional activity of these subpopulations, by analyzing the frequency of these cells producing IFN-\F067, TNF and IL-10 by multiparametric flow cytometry. Furthermore, we analyzed the expression of genes encoding transcription factors, which are critical for the differentiation of T lymphocytes by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Healthy volunteers from endemic area for leprosy were included in our study. Among the results, we highlighted the significantly increased frequency of CD8+/TNF+ T effector memory cells among ENL patients This group also showed a significantly increased frequency of CD4+ and CD8+ IL-10+ producing T lymphocytes, particularly in response to antigen. However, this finding was only observed in naïve and central memory T cell subpopulations. Moreover, ENL group showed a reduced frequency of CD4+ and CD8+ IFN-\F067 producing cells, and a significantly reduced expression of STAT4 and TBX21 transcription factors. Finally, we observed positive and significant strong correlation between bacillary index (BI) of ENL patients and CD4+/TNF+ cells frequency. The same group also presented a significant negative correlation between IB and the frequency of CD4+/IL-10+ T cells. Our results corroborate other findings about the imbalanced immune response in ENL genesis, and show an association between IB and the frequency of T cells producing pro-inflammatory cytokines IFN-\F067 and TNF. Briefly, the data obtained and discussed in this work suggest the major contribution of memory T cells, specifically CD8+ effector memory cells, to transient alteration in the immune response to M. leprae, a hallmark of ENL