Participação da Fosfatidilserina exposta por Toxoplasma gondii na indução de Corpúsculos Lipídicos em Macrófago

• Main Author: Roberto Neto, João
• Other Authors: Calabrese, Kátia da Silva
• Language: Portuguese
• Published: 2016
• Subjects: Toxoplasma; Células Sanguíneas; Macrófagos; Fosfatidilserinas
• Online Access: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/13515

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 joao_neto_ioc_mest_2013.pdf: 1253667 bytes, checksum: d031c93a4aceeafda254d56260f64a77 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil === Toxoplasma gondii é o agente causador da toxoplasmose, doença distribuída em grande parte do globo infectando vertebrados endotérmicos. T. gondii é um parasita intracelular obrigatório e não sintetiza colesterol, recrutando-o da célula hospedeira. Esse parasito é dividido em grupos, de acordo com a virulência, sendo a cepa RH e a cepa ME-49 representantes de parasitos de maior e de moderada virulência, respectivamente. Semelhante a outros parasitos protozoários, T. gondii expõem fosfatidilserina (PS) na membrana externa, sendo um exemplo do mimetismo apoptótico, o que tem sido sugerido como mecanismo de evasão. Corpúsculos lipídicos (CL) são organelas lipídicas comumente encontradas em uma gama de diferentes células, de plantas, parasitos e animais. CL são modulados positivamente por diferentes fatores, incluindo células apoptóticas, parasitos como Trypanosoma cruzi, Leishmania spp. e Plasmodium falciparum e citocinas, como o fator de transformação do crescimento (TGF-\03B2). Nosso trabalho visou investigar se a PS exposta na membrana plasmática de T. gondii pode induzir CL em macrófagos. Independente da virulência da cepa utilizada, T gondii foi capaz de induzir CL em macrófagos infectados. A indução foi maior com aumento da relação parasito/macrófago. Subpopulações de T. gondii, PS positivos (PS+) e PS negativo (PS-) foram obtidas e a subpopulação de PS + induziu mais CL em relação a subpopulação de PS-. A neutralização da PS dos parasitos PS+ ou da população total com anexina-V foi capaz de reduzir o número de CL nas células hospedeiras. Lipossomos contendo PS induziram mais CL em macrófagos quando comparados aos lipossomos sem PS Curiosamente, parasitos PS- também foram capazes de aumentar o número de CL em macrófagos, sugerindo a participação de outros fatores nesse processo indutor. Após a interação de macrófagos com T. gondii, observamos aumento no número de CL tanto em células que continham o parasita quanto em células vizinhas não parasitadas. Esse achado sugere uma sinalização 18 parácrina entre as células. O TGF-\03B2 é descrito como sendo secretado após infecção por T. gondii, e sua neutralização causou inibição da formação de CL induzido por T. gondii, revelando sua participação nesse processo. Concluímos que T. gondii é capaz de induzir CL em macrófagos, e essa indução tem a participação da PS exposta em sua membrana. A indução dessas organelas ocorreu independente da virulência da cepa. Esse processo é potencializado pela ação parácrina do TGF-\03B2 === Toxoplasma gondii is the causative agent of toxoplasmosis, a disease largely spread across the globe infecting almost any endothermic vertebrates. T. gondii is an obligatory intracellular par asite that can not synthesize cholesterol thus relying on recruiting it from the host cell. This parasite is divided into groups according to the virulence, and the RH strain and the ME - 49 strain representing highly and moderate virulen t parasites, respect ively. Similar to other protozoan parasites, T. gondii exposes phosphatidylserine (PS) on the outer membrane , an example of the apoptotic mimicry , which has been suggested as a mechanism of evasion ,. Lipid bodies (LB) are lipid organelles commonly found in a range of different cells of plants, animals and parasites. LB are positively modulated by different factors, including apoptotic cells, parasites such as Trypanosoma cruzi , Leishmania spp. and Plasmodium falciparum and cytokines such as transforming gro wth factor (TGF - β) . Our study aimed to investigate whether the PS exposed on the plasma membrane of T. gondii in macrophages can induce LB . T gondii was capable of inducing LB in infected macrophages, i ndependently of the virulence of the strain used . T he LB induction was greater with increase in parasite / macrophage ratio. Subpopulations of T gondii posi tive PS (PS +) and negative (PS - ) were obtained and PS+ subpopulation induced significantly greater LB formation compared to PS - subpopulation. The neutra lization of PS with annexin - V was able to reduce the number of LB o n PS+ parasites or on the total parasite population , but not on PS - parasites. Liposomes containing PS induced more LB than liposomes without PS. Interestingly, PS - parasites induced LB f ormation in macrophages, suggesting the involvement of other factors. After interaction of T. gondii with macrophages , we observed increased LB formation both in cells containing internalized parasite s as well as in bystander cells without internalized par asites , suggestive of a paracrine signaling. TGF - β is described as being secreted after infection with T. gondii and its neutralization caused inhibition of T. gondii - induced LB formation , pointing to TGF - β participation in this process. We conclude that T. gondii is able to induce LB formation in macrophages . The induction of these organelles was independent of strain virulence. T. gondii - induced LB formation occurs through signaling triggered by PS exposed on the parasite membrane. This process is also amplified by TGF - β a cting in a paracrine fashion