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Previous issue date: 2016-02-26 === A fibrose cardíaca é uma importante manifestação da cardiomiopatia chagásica. O papel dos fibroblastos cardíacos (FCs) nesse processo é pouco estudado. Nesse trabalho investigamos o efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi (cepa Y) e do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação de FCs in vitro, visando compreender o papel de FCs ativados no processo de gênese da fibrose cardíaca na infecção chagásica. Os FCs foram obtidos a partir de culturas primárias de células cardíacas de fetos de camundongos Swiss Webster, e sua ativação avaliada através da análise da proliferação, diferenciação destas células em miofibroblastos e a expressão de proteínas de matriz extracelular (ECM) através de imunofluorescência (IF) e Western blotting (WB). A caracterização das culturas foi feita através de análise morfológica e funcional e pela análise da expressão dos marcadores tropomiosina sarcomérica (TS) e receptor de domínio de discoidina 2 (DDR2). No nosso sistema de cultivo, 40% dos FCs foram infectados pelo T. cruzi quando utilizamos uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10 e 24h de interação
As análises da expressão de alfa actina de músculo liso (\03B1-SMA) por WB, revelaram aumento desta proteína nas culturas infectadas sugerindo diferenciação para miofibroblasto nos tempos de 6h e 24h pós-infecção. As análises de proteínas de ECM revelaram aumento na expressão de fibronectina (FN) após 6h, 24h e 48h de infecção e de laminina (LN) após 6h e 24h, quando comparadas as culturas não infectadas. O tratamento com TNF não estimulou a produção de TNF e NO pelos FCs. TNF também não induziu a diferenciação e a síntese de ECM, porém influenciou o processo de proliferação destas células, revelado pelo aumento de células ki-67+ por IF. Ainda, a citocina reduziu as taxa de infecção dos FCs pelo parasita. Assim, nossos resultados demonstram um efeito da infecção pelo T. cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos, seja através da indução de diferenciação celular e expressão de proteínas de ECM, ou ainda pela indução de proliferação dos FCs, processos estes que podem contribuir para a gênese da fibrose cardíaca observada na doença de Chagas === Cardiac fibrosis is an important manifestation of Chagas cardiomyopathy
. The
involvement of cardiac fibroblasts (CFs) in this process is understudied. Here we
investigated the effect of
Trypanosoma cruzi
infection (Y strain) and tumor necrosis
factor (TNF) on CFs
in vitro
, aiming to understand the role of activated CFs in the
process of genesis of cardiac fibrosis in chagasic infection. The CFs were obtained
from primary cardiac cell cultures from Swiss Webster mice fetuses, and CFs
activation analyzed by proliferation, myofibroblast differentiation and extracellular
matrix (E
CM) proteins expression, through immunofluorescence (IF) and
Western
blotting
(WB). The characterization of cultures was made through morphological and
functional analysis and through analysis of expression of the markers sarcomeric
tropomyosin (TS) and di
scoidin domain receptor 2 (DDR2). In our culture system,
40% of CFs were infected by
T. cruzi
using a multiplicity of infection (MOI) of 10 e
24h of interaction. WB analysis of alpha sm
ooth muscle actin (α
-
SMA) expression
revealed increased expression of this protein in
T. cruzi
-
infected CFs suggesting cell
differentiation into myofibroblasts at 6h and 24h post infection. ECM proteins
analyses revealed increased expression of fibronectin
(FN) at 6h, 24h e 48h pos
infection and laminin (LN) at 6h and 24h in
T. cruzi
-
infected cultures compared with
non
-
infected ones. TNF treatment did not stimulate TNF and NO production by CFs.
TNF also did not induce differentiation and ECM production by C
Fs, but influenced
the proliferation process of these cells, revealed by increase of ki
-
67+ cells, through
IF. Furthermore, the cytokine decrease the infection rate of CFs by
T. cruzi
.
Therefore, our results demonstrate an effect of
T. cruzi
infection and
TNF on cardiac
fibroblasts activation, either through induction of cell differentiation and expression of
ECM proteins, or by induction of CFs proliferation, processes which may contribute to
the genesis of cardiac fibrosis in Chagas disease.
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