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Previous issue date: 2015-04-14 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil === Os indivíduos com hanseníase multibacilar (MB) apresentam uma baixa capacidade de produzir IFN-\03B3 em resposta ao Mycobacterium leprae, agente etiológico da doença, e consequentemente, apresentam uma alta carga bacilar constituindo as principais fontes de disseminação e transmissão do bacilo. Por outro lado, contatos intradomiciliares destes doentes constituem o grupo de indivíduos com maior risco de adoecimento. O presente estudo tem como objetivo geral compreender os mecanismos de modulação negativa da resposta imune celular M. leprae específica em indivíduos sadios com alta exposição ao bacilo e em indivíduos com hanseníase MB, até hoje pouco esclarecidos. Para isto, avaliamos as frequências de linfócitos T CD4+ e CD8+ virgens, de memória central e de memória efetora recém-ativados em resposta ao M. leprae ou conjuntos de peptídeos nonâmeros (restritos a MHC de classe I, P.C.I) e pentadecâmeros (restritos a MHC de classe II, P.C.II) específicos do M. leprae em células mononucleares de sangue periférico (CMS) dos contatos domiciliares no início (T0) e ao longo do tratamento do caso índice (T1). Em paralelo, os níveis de 16 citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento secretados por CMS destes contatos estimuladas in vitro, em T0 e T1, com os antígenos mencionados. Nove contatos foram avaliados, dos quais sete foram vacinados com BCG em T0
Na maioria dos contatos, independente da vacinação ou não com BCG, observou-se um aumento da frequência de linfócitos T CD4+ de memória efetora a pelo menos um dos antígenos utilizados em T1. Detectou-se, também, um aumento consistente de células T CD8+ de memória efetora respondedoras a P.C.I. Observou-se variações nas frequências de linfócitos T CD4+ e/ou CD8+ produtores de IFN-\03B3 ou IL-10 M. leprae específicas no sangue periférico dos contatos. Entretanto, com o tamanho atual da amostragem populacional não foi possível observar diferenças estatisticamente significativas entre tempos avaliados. A vacinação com BCG gerou um perfil de resposta imune Th1 com aumento da secreção de IFN-\03B3 em seis dos sete contatos vacinados. Observamos, ainda, um aumento significativo da produção de G-CSF, GM-CSF, MCP-1, IL-6 e MIP-1\03B2 em resposta ao M. leprae ou a, pelo menos, um dos conjuntos de peptídeos M. leprae-específicos em T1. A partir dos dados obtidos, foi possível observar que o tratamento do caso índice e consequente eliminação da fonte de M. leprae vivo no ambiente juntamente com a vacinação com BCG contribuiram para o aumento de resposta imune celular M. leprae-específica dos contatos de pacientes multibacilares
Numa última etapa do trabalho, padronizamos um protocolo para isolamento de células provenientes de lesões de pele de pacientes MB. Nossos dados iniciais sugerem uma abundância de células T CD8+ nestas lesões, concordando com observações anteriores. Uma análise detalhada do fenótipo funcional das células presentes na lesão lepromatosa poderá contribuir na definição das populações celulares envolvidas na modulação negativa da resposta imune protetora contra o M. leprae. Além disso, a caracterização funcional particularmente das células T CD8+ específicas para P.C.I seria de grande relevância para o entendimento da resposta imune protetora na hanseníase, com potencial aplicação no desenvolvimento de vacinas mais eficazes para o controle da doença === I
ndividual
s
with multibacillary leprosy (MB) have a low capacity to produce IFN
-
γ
in
response to
Mycobacterium leprae
,
etiologic
al
agent
of leprosy
, and consequently, have
a high bacterial load, being the main sources of dissemination and transmission of the
bacillus. Household contacts
(HC)
of these patients constitute the group of i
ndividuals
at highest risk for leprosy. The aim of the present study is to understand the mechanisms
of cellular immune response downregulation
by
M. leprae
in healthy individuals with
high exposure to
M.
leprae
and patients with MB leprosy, a phenomenon t
hat remains
poorly understood until today. In this work we evaluated the frequencies of
recently
activated naive
, central memory and effector memory CD4
+
and CD8
+
T cells, in
response to
M. leprae
and
a pool
of
M. leprae
-
specific peptide nonamers (
MHC
clas
s I
-
restricted, P.C.
I) and pentadeca
mers (
MHC
class II
-
restricted, P.C.II) in the peripheral
blood
mononuclear cells (PBMC)
of
HC
at the beginning (T0) and during the treatment
of the index case (T1). We also compared the levels of 16 cytokines, chemokines
and
growth factors secreted by
PBMC
of these contacts stimulated
in vitro
with the same
antigens at T0 and T1. Nine contacts were evaluated, which seven were vaccinated with
BCG at T0. Most of the
HC
, independently of BCG vaccination, showed increased
fre
quency of CD4
+
effector memory to at least one of the antigens used in T1. A
consistent increase of CD8
+
effector memory responsive to P
.
C
.
I was also detected. It
was observed varia
tions in the frequencies of CD4
+
and
/
or CD8
+
T cells producing IFN
-
γ or IL
-
10
M. leprae
-
specific
by PBMC from HC
. However, with the current size of the
sample population was not observed statistically significant differences between
the
time points
studied. The BCG vaccine generated a Th1 immune response profile with
increased s
ecretion of IFN
-
γ
in six out of seven vaccinated contacts. We also
have
observed a significant increase in the
production
of
inflammatory mediators
, such as
G
-
CSF, GM
-
CSF, MCP
-
1, IL
-
6 and MIP
-
1
β
in response to
M. leprae
or at least one of the
M. leprae
-
specific peptide
po
ols
at T1. It was observed in the
our
data that index case
treatment and consequent elimination of the live
M.
leprae
source from the
environment, together with BCG vaccination contributed to the increase in
M. leprae
-
specific cellular immune response in
H
C
of MB patients. In the final
step of this
work,
we standardized a protocol for isolation of cells from biopsies of skin lesions of MB
patients.
I
n agreement with previous observations
, our
i
nitial data suggest an abundance
of CD8
+
T cells. A detailed ana
lysis of the functional phenotype of the cells present in
lepromatous lesions may contribute to the definition of cell populations involved in
negative modulation of the immune response against
M. leprae
. The functional
characterization, particularly of CD
8
+
T cells specific to P.C.I, would be of great
relevance to understand the protective immune response in leprosy, with potential
application in the development of more effective vaccines to control the disease
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