| Summary: | A garra do diabo, como é conhecida a planta Harpagophytum procumbens (Hp), é utilizada no tratamento de doenças reumáticas como um anti-inflamatório e analgésico natural. Acredita-se que sua propriedade benéfica seja devido à presença do harpagosídeo (HA), um iridóide glicosídico encontrado em grandes concentrações na planta. Uma vez que Hp e HA são utilizados como fitoterápicos e portanto candidatos a novos agentes farmacológicos, o objetivo deste estudo foi determinar a toxicidade em células metabolizadoras de carcinoma hepatocelular humano (HepG2/C3A) utilizando os ensaios do MTT, cometa, cinética de proliferação, análise de ciclo celular, e expressão relativa de genes de ciclo celular (CDK1, CDK2, CDK4, CDK6, CDKN1A, CDKN2A, CDKN1B, CDKN2B, CDKN2C, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, TP53, BIRC5, PCBP4), estresse de retículo endoplasmático (ERN1, HSPA5 e EIF2AK3), danos ao DNA (CHEK1 e ATR), e metabolismo de xenobióticos (CYP1A1, CYP1A2, CYP2D6, CYP3A4, CYP26B1 e UGT1A). Nos ensaios foram utilizadas as concentrações de harpagosídeo que variaram de 300 a 700 µM; e as concentrações de Hp variaram de 50 a 250 µg/mL. No MTT, foi observado citotoxicidade de HA somente na concentração de 700 µM, e em todas as concentrações testadas de Hp. Na análise de ciclo celular, no tratamento HA 700 µM houve redução significativa de fase S, e aumento de G2/M; nos tratamentos HA 300 µM, Hp 50 e Hp 150 µg/mL não houve modificações. Na cinética de proliferação, com exceção do tratamento Hp 50 µg/mL, em todos os testes houve redução do número de células. No ensaio do cometa, nenhum tratamento mostrou-se genotóxico. De maneira geral não houve alteração significativa da expressão relativa dos transcritos de genes de ciclinas, CDKs, CDKNs, genes de estresse de retículo, e outros controladores do ciclo, contudo houve redução significativa para os genes CDK6 e ATR no tratamento Hp 50 µg/mL. Para os genes de metabolismo de xenobióticos, observa-se uma redução significativa de CYP1A2 em todos os tratamentos, e CYP3A4 em HA 300 e 700 µM. A partir disto, observa-se que a citotoxicidade observada por Hp e HA não envolve a regulação transcricional das ciclinas e CDKs estudadas, mas devido a inibição do metabolismo como visto nos resultados de MTT e expressão de genes de metabolismo de drogas, levando a morte celular, como observado na cinética de proliferação. Já para HA esta inibição também leva a parada em G2/M. Os dados mostram que o tratamento com Hp ou HA pode ser citotóxico devendo ser usado ponderadamente, correlacionando o seu uso com os benefícios no tratamento de doenças reumáticas. === Devil's claw, such as the Harpagophytum procumbens (Hp) plant is known, is used in the treatment of rheumatic diseases. It is believed that a beneficial property is due to the presence of harpagosídeo (HA), an iridoid glycoside found in large concentrations in the plant. Since Hp and HA are candidates for new pharmacological agents, the aim of this study was to determine the toxicity in human hepatocellular carcinoma cells (HepG2/C3A) using the MTT assays, comet, proliferation kinetics, cell cycle analysis, and expression on cell cycle genes (CDK1, CDK2, CDK4, CDK6, CDKN1A, CDKN2A, CDKN1B, CDKN2B, CDKN2C, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, P53, BIRC5, PCBP4), reticulum stress (ERN1, HSPA5 and EIF2AK3), DNA damage (CHEK1 and ATR) and xenobiotic metabolism (CYP1A1, CYP1A2, CYP2D6, CYP3A4, CYP26B1 and UGT1A). In the tests, Hp concentrations ranged from 50 to 250 µg/mL, and harpagoside concentrations from 300 to 700 uM. In the MTT, HA cytotoxicity was observed only at a 700 uM, and in all Hp tested concentrations. In the cell cycle analysis, the treatment HA 700 uM there is a significant reduction of S phase, and G2/M increased; in treatments HA 300 uM, Hp 50 Hp and 150 mg/mL there was no modifications. In proliferation kinetics, except for the Hp 50 µg/mL treatment, in all experiment there was decrease in cell number. In the comet assay, no treatment was genotoxic. Overall there was no significant change in the relative expression of the transcripts of cyclin genes, CDKs, CDKNs, reticulum stress genes, and others cell cycle controllers; however there was a significant reduction of CDK6 and ATR at Hp 50 ?g/mL treatment. For xenobiotic metabolism genes, there is a significant reduction of CYP1A2 in all treatments, and CYP3A4 on HA 300 and 700 uM. From this, the cytotoxicity observed by the HA and Hp do not involve the transcriptional regulation of cyclins and CDKs studied, but due to inhibition of metabolism as seen in the results of the MTT and expression of drug metabolism genes, leading cell death, as observed in proliferation kinetics. As for HA such inhibition may also be leading to arrest in G2/M. The data show that treatment with Hp or HA can be cytotoxic and must be used judiciously to correlate their use with the benefits in the treatment of rheumatic diseases.
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