| Summary: | A busca por drogas anticâncer mais eficazes é de grande interesse dos pesquisadores e da sociedade. Com esse propósito, surgiram estudos com a salinomicina, um antibiótico ionóforo utilizado como aditivo alimentar e para o tratamento da coccidiose em caprinos, ovinos e aves. Estudos mostram que a salinomicina apresenta potencial antitumoral em células tronco de câncer e é capaz de induzir morte celular por apoptose de forma seletiva em células tumorais. Dessa forma, devido à promissora utilidade da salinomicina na terapia do câncer, o presente trabalho avaliou a sua atividade em duas linhagens celulares humanas tumorais, carcinoma hepatocelular (HepG2/C3A), adenocarcinoma de mama (MCF-7), e em uma linhagem não tumoral de mama (HB4a), a fim de verificar sua ação seletiva. A avaliação da proliferação celular em tempo real mostrou que as células não tumorais HB4a apresentam maior resistência à salinomicina em relação às células tumorais e esses dados foram confirmados pelo ensaio de citotoxicidade. Valores de IC50 (concentração que inibe 50% da população celular) mostram a maior sensibilidade das células MCF-7 à salinomicina. Na detecção de indução de danos no DNA pelo ensaio do cometa, apenas as células MCF-7 foram positivas. A análise por citometria de fluxo mostrou que somente as linhagens tumorais foram induzidas à morte celular por apoptose/necrose. Aumento da expressão dos genes GADD45A e CDKN1A foi observado em todas as linhagens celulares, indicando indução de danos no DNA e parada do ciclo celular. Nas células tumorais, houve redução da expressão dos genes CCNA2 e CCNB1, resultando em parada do ciclo celular em G2/M. Como consequência da parada do ciclo celular, as células tumorais foram encaminhadas ao processo de morte por apoptose através da regulação do gene BAK na linhagem HepG2/C3A e via inibição dos genes antiapoptóticos BCL-XL e BIRC5 na linhagem MCF-7. As linhagens tumorais apresentaram forte inibição do gene antiapoptótico BCL-2, e a linhagem HB4a apresentou inibição de CASP9. Esses dados contribuem para a elucidação do mecanismo de ação da salinomicina como uma promissora droga antitumoral pela sua atividade seletiva. Portanto, verificou-se que as células tumorais foram encaminhadas à apoptose envolvendo diferentes marcadores moleculares e, pela primeira vez, foi observada a maior resistência à salinomicina das células não tumorais de mama HB4a. === The search for more effective anticancer drugs is of great interest of researchers and society. For this purpose, have emerged studies with salinomycin, an ionophore antibiotic used as a food additive and for the treatment of coccidiosis in goats, sheep and poultry. Studies show that salinomycin has anti-tumor potential against cancer stem cells and selectively destroys tumor cells by inducing apoptotic cell death. The promise of that approach prompted us to study salinomycin by assessing two human tumor cell lines, namely, hepatocellular carcinoma cells (HepG2/C3A) and breast adenocarcinoma (MCF-7), compared to a non-tumor breast cell line (HB4a) in order to verify its selective activity. Real-time assessment of cell proliferation showed that HB4a non-tumor breast cells are more resistant to salinomycin than are tumor cell lines and these data were confirmed in a cytotoxicity assay. The IC50 values (half maximal inhibitory concentration) show the increased sensitivity of MCF-7 cells to salinomycin. In the comet assay, only MCF-7 cells showed the induction of DNA damage. Flow cytometric analysis showed that cell death by apoptosis/necrosis was only induced in tumor cell lines. The increased expression of GADD45A and CDKN1A genes was observed in all cell lines, indicating DNA damage induction and cell cycle arrest. Decreased expression of CCNA2 and CCNB1 genes occurred only in tumor cells, resulting in G2/M cell cycle arrest. As a result of the cell cycle arrest, tumor cell apoptosis was activated through BAK gene regulation in HepG2/C3A cells and through inhibition of the antiapoptotic genes BCL-XL and BIRC5 in MCF-7 cells. The tumor cell lines showed strong inhibition of the antiapoptotic gene BCL-2, and the HB4a cell line showed inhibition of CASP9. These data contribute to clarifying the mechanism of action of salinomycin as a promising antitumor drug, given its selective activity. Thus, we observed that the induction of apoptosis in tumor cells occurred through different molecular markers, and for the first time, we observed the higher resistance of HB4a non-tumor breast cells to salinomycin.
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