| Summary: | Ocratoxina A (OTA) e fumonisina B1 (FB1) são metabolitos secundários tóxicos produzidos por fungos e a ingestão de stas micotoxinas estão relacionados com diversas doenças em seres humanos, bem como em outras espécies. O objetivo de este estudo foi investigar os efeitos imunotoxicopatológicos de OTA isoladamente ou em combinações com FB1 em pintinhos de corte do experimento-1 para avaliar as respostas imunopatológicos de pintinhos de corte submetidos a diferentes níveis de contaminação de OTA por meio da ração. Para este efeito, os pintinhos de 42 dias foram divididos em sete grupos (A, B, C, D, E, F, G). O grupo A foi composto de animais controle; enquanto que nos grupos B, C, D, E, F e G, de animais alimentados com ração contaminada com OTA nas concentrações 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,9 e 1,1 mg/Kg de ração, respectivamente, durante 21 dias. Pesos relativos do fígado, rins, bursa de Fabricius, timo e baço foram registrados no final do experimento. Perfil hematológico e alterações histopatológicas no fígado, rins, baço, timo e bursa das aves foram determinados para avaliar os danos causados por OTA. Os níveis de IgY e IgA séricas totais foram avaliados por ELISA para determinação da resposta imune humoral. Os sinais clínicos observados incluíram diarreia grave, apatia, depressão, diminuição do consumo de ração, aumento na ingestão de água e penas onduladas. Lesões macroscópicas patológicas no fígado e nos rins demonstraram coloração clara, friável e hemorrágico. O aumento significativo no peso relativo dos rins e do fígado (grupo C, D, E, F e G), enquanto diminuição significativa no peso do baço (grupo F e G), da bursa de Fabricius e do timo (todos os grupos tratados) foram observadas nos grupos tratados com OTA (p <0,05). Histologicamente, fígado e rins demonstraram alterações degenerativas e infiltrativas, enquanto baço, bursa e timo demonstraram redução acentuada de células linfóides. O perfil hematológico indicou diminuição no número de hematócrito, eritrócitos, hemoglobina, leucócitos e linfócitos, enquanto foi observado aumento significativo em heterófilos e monócitos (p<0,05). Além disso, eosinófilos foram detectados em grupos tratados com concentrações mais elevadas de OTA. Níveis de IgY e IgA foram reduzidos significamente em todos os grupos tratados com OTA em dosedependência (p<0,05). A redução do consumo de ração, ganho de peso corporal dos pintinhos e perfil bioquímico sérico indicaram um dano severo ao fígado e rins em aves alimentadas com ração contaminada por OTA. No entanto, osníveis de glicose e proteína total no soro foram significativamente menores (p <0,05) em todos os grupos tratados com OTA. Este estudo indica que houve efeitos imunopatológicos de OTA em pintinhos tanto em baixa quanto em concentrações mais elevadas de OTA na dieta, mesmo em ração contaminada com 0,1 mg de OTA/kg de peso corporal. Além disso, os resultados sugerem que houve efeitos patológicos de forma depressor no crescimento e imunossupressores devido a ingestão de OTA, sendo de forma crescente com aumento da concentração de OTA na dieta. O experimento-2 foi realizado em 36 pintinhos de corte, não sexados, 1 dia de idade e livres de agents patogênicos específicos (Cobb) por um período de 21 dias. Os animais do estudo eram do mesmo bando de reprodução. No primeiro dia, os pintinhos foram separados em seis grupos (A, B, C, D, E e F), com 6 animais em cada grupo. Com cinco dias, os pintinhos dos grupos B, C, D, E e F foram inoculados subcutaneamente com concentração de 0,1; 0,5; 0,9; 1,3 e 1,7 mg de OTA /Kg de peso corporal respectivamente, o grupo controle não inoculado-grupo A. Os animais do grupoA, B, C e D demonstraram-se, interesse normal pela água e apresentaram penas brilhantes durante todo o período do experimento, enquanto os grupos experimentais E e F demonstraram-se deprimidos, abatidos, com penas onduladas e letárgico e, o grau dessas alterações aumentou após duas semanas da inoculação de OTA. Similarmente, graves lesões foram também mais severas nos grupos experimentais E e F, enquanto alterações de menores graus foram observadas em rins, fígado, bursa de Fabricius, baço e timo nos grupos B, C e D. O peso relativo dos rins e fígado aumentou significativamente nos grupos B, C, D, E e F inoculados com OTA em comparação com o grupo controle A (p <0,05). Similarmente, o peso relativo da bursa de Fabricius, timo e baço foi significativamente reduzido em todos os grupos tratados com OTA em comparação ao grupo controle A (p <0,05). Histologicamente, os rins do grupo E e F demonstraram leve a moderado grau de congestionamento, focos de núcleos picnóticos, degeneração e congestionamento no parênquima. Nos fígados do grupo D e E foram observados congestionamento, alteração de gordura, espaços sinusoidais dilatadas e infiltração de células mononucleares em torno dos vasos sanguíneos, com algumas células com núcleos picnóticos. Bursas demonstraram grandes danos degenerativos como cariopicnose, cariorrexe, depleção de células linfóides nos folículos e atrofia de alguns folículos nos animais dos grupos D, E e F. Os timos do grupo D, E e F apresentaram depleção de células linfóides, congestão dos vasos sanguíneos e alterações degenerativas. No baço, as principais alterações patológicas foram observados nos centros germinais, predominantemente em pintinhos do grupo E e F. Os níveis de hematócrito, eritrócitos, hemoglobina e leucócitos foram reduzidos significativamente nos pintinhos dos grupos B, C, D, E e F em comparação com o grupo controle (A) (p<0,05).Do mesmo modo, nível de heterófilo no grupo E e F foram significativamente reduzidos em relação ao grupo controle A (p<0,05). Nível de monócitos foi significativamente aumentado no grupo tratado F em comparação com grupo controle (A) (p <0,05). Contudo um aumento significativo não foi detectado em pintinhos do grupo B, C, D e E em comparação com grupo contole A. O aumento de eosinófilos foi detectado em pintinhos do grupo D, E e F. Os linfócitos foram significativamente reduzidos (p<0,05) em pintinhos dos grupos D, E e F, em comparação com grupo controle (A). Na resposta immune humoral, os níveis de IgY e IgA séricas foram determinados no 14° e 21° dia após inoculação de OTA.Os resultados referente sao nível de IgY do 14° ou 21° dia após a inoculação de OTA mostraram redução significativa (p <0,05 ) em pintinhos de grupos B, C, D, E e F após 14° dia em comparação com o grupo controle (A). Nível de IgA foi significativamente reduzida (p<0,05) nos grupos C, D, E e F no 14° dia e em todos os grupos (B, C, D, E e F) no 21° dia em comparação ao grupo controle A. Os níveis de diferentes parâmetros bioquímicos como ureia, triglicéridos, ácido úrico, creatinina, ALT, AST, AP e GGT foram aumentados (p<0,05) e, glicose e proteína total no soro diminuíram significativamente (p <0,05) em todos os grupos tratados com OTA. No pós-morte, lesões graves como hemorragias, alteração da cor dos órgãos e posição alterada foram observadas em grupos tratados com OTA. O consumo de ração, peso corporal e conversão alimentar também foram alterados em todos os grupos tratados com OTA em relação ao controle. Portanto, conclui-se que independente da via de contaminação, OTA possui efeitos multifacetados na análise bioquímica, alterações macroscópicas em órgãos viscerais e no consumo de ração, peso corporal e conversão alimentar em frangos de corte. Para avaliar o efeito de OTA na resposta a vacinação contra Eimeria, o experimento-3 foi realizado com 60 pintinhos de corte fêmeas com 1 dia de idade e livres de agentes patogênicos específicos, divididos em 5 grupos (A, B, C, D e E), com 12 aves em cada grupo. Todos os grupos foram imunizados com vacina comercial contra Eimeria e os grupos B, C, D e E foram alimentados com ração contaminada nas concentrações de 0,1mg de OTA+0,1 mg de FB1; 0,3mg de FB1;0,5 mg OTA+FB1 e 0,9 mg de FB1/Kg de ração, respectivamente, por um período de 21 dias. No término do experimento, o peso relativo do órgão, parâmetros hematológicose bioquímicos foram determinados. Nível... === Ochratoxin A (OTA) and fumonisin B1 (FB1) are fungal secondary metabolites with pathological effects in humans and animals. Investigated were the immunotoxicopathological effects of OTA alone or in combinations with FB1 on broilers chicks. Experiment-1 evaluated the immunopathological responses due to ingestion of OTA contaminated feed. 42 one day old broiler chicks divided into seven groups. Group A, was the control, while group B to G were fed with OTA contaminated diet at 0.1, 0.3, 0.5, 0.7, 0.9 and 1.1 mg/Kg feed, respectively, for 21 days. Relative weights of liver, kidneys, bursa, thymus and spleen were recorded at the end of experiment, as well as hematologic and histopathological alterations in these organs were assessed, while total IgY and IgA were measured by ELISA. Clinical signs included severe diarrhea, dullness, depression, decrease in feed intake, increase water intake and rippled feathers.Macroscopic lesions on liver and kidneys included lighter in coloration, friable and hemorrhagic. A significant increase in the relative weight of kidneys and liver (C to G), while significant decrease in weight of spleen (F and G), bursa and thymus (all treated groups) were observed in OTA treated groups (p<0.05). Histologically, liver and kidneys of chicks showed degenerative and infiltrative changes while spleen, bursa and thymus showed marked reduction of lymphoid cells. Hematological profile indicated decrease in hematocrit, erythrocytes, hemoglobin, leukocytes and lymphocytes numbers, concentrations, while heterophils and monocytes increased (p<0.05). Increased eosinophils were detected with higher OTA doses. Levels of IgY and IgA were decreased in all OTA treated groups in a dose dependent (p<0.05). Decrease in the feed intake and body weight gain of the chicks and serum biochemical profile indicated a severe damage to liver and kidneys in OTA fed chicks. The higher levels of urea, triglycerides, uric acid, creatinine, alanine aminotransferases (ALT), aspartate aminotransferases (AST), Alkaline Phosphatase (AF) and gammaglutamyl transferases (GGT) and lower levels of glucose and serum total protein were detected in all OTA treated groups with(p<0.05). Experiment-2 was carried out on 36 unsexed 1-day-old specific pathogen free broiler chicks (Cobb) of same breeding flock to evaluate the effect of subcutaneous OTA inoculation for duration of 21 days. On day 1, chicks were divided into six groups (A to F), having 6 birds in each group. Chicks in groups B to F, were inoculated OTA subcutaneously under the skin of wings on day 5th of age at the dose rate of 0.1, 0.5, 0.9, 1.3 and 1.7 mg OTA/kg of body weight, while group A was kept as control. Chicks in groups A to D were alert, with normal interest to water and shining feathers throughout the length of the experiment while those of experimental groups E and F were depressed, dejected, having rippled feathers and lethargic with increase degree of these changes after two weeks of OTA inoculation. Similarly, lesions were also more severe in groups E and F, while changes of minor degrees were noted in kidneys, liver, bursa, spleen and thymus of group B to D. The relative weight of kidneys and liver was significantly increased in all OTA inoculated groups, while relative weight of bursa of fabricius, thymus and spleen was decreased (p<0.05). Histologically, kidneys of group E and F showed mild to moderate degree of congestion, foci of pyknotic nuclei, degeneration and congestion in parenchyma. Liver of group D and E showed congestion, fatty change, dilated sinusoidal spaces and mononuclear cells infiltration around blood vessels, some pyknotic nuclei. Bursa showed major degenerative damage like karyopyknosis, karyorrhexis, depletion of lymphoid cells in the follicles and atrophy of some follicles in chickens of groups D, E and F. Thymus of group D, E and F showed depletion of lymphoid cells, congestion of blood vessels and degenerative changes. The main pathological changes in spleen occurred in the germinal centers, predominantly in group E and F. Hematocrit, erythrocytes, hemoglobin and leukocytes levels were reduced in groups B to F (p<0.05). Similarly, heterophils level in OTA treated group E and F were significantly reduced as compared to control-A (p<0.05). Monocytes level was significantly increased in OTA treated group F (p<0.05). However, no significant increase was detected in chicks of group B to F. An increased eosinophils were detected in treated group D, E and F. Lymphocytes were significantly reduced (p<0.05) in groups D to F. Humoral immune response, serum levels of IgY and IgA were determined on day 14th and 21st of OTA inoculation. Results regarding IgY level at 14 or 21 days post OTA inoculation showed significant reduction (p<0.05) in chicks of groups B, C, D, E and F after 14 days OTA inoculation in relation to control group. IgA level was significantly reduced (p<0.05) in groups C, D, E and F at 14 days and in all (B, C, D, E and F) in 21 days post OTA inoculation in relation to control group A. The levels of biochemical parameters as urea, triglycerides, uric acid, creatinine, ALT, AST, AP and GGT were increased (p<0.05) whereas, glucose and serum total protein decreased (p<0.05) in all the OTA treated groups. On postmortem, gross lesion like hemorrhages, change in color of organs and altered position was observed in OTA treated groups. Feed intake, body weight and feed conversion were also altered in all OTA treated groupsl.It is concluded that independent oN route of entry, OTA have multifaceted effects on serum biochemistry, gross changes in visceral organs and on feed intake, body weight and feed conversion in broilers. In order to evaluate the effect of OTA in response to vaccination for Eimeria, the experiment-3 it was carried out with 60 female 1-day-old specific pathogen free broiler chicks of five groups (A to E), 12 birds in each. All groups received commercial Eimeria vaccine and then groups B, C, D and E, were provided OTA-contaminated feed at 0.1mg OTA+0.1mg FB1, 0.3mg FB1, 0.5mg OTA +FB1 and 0.9 mg FB1/kg feed, respectively, for a period of 21 days, and relative organ weight, hematological parameters, biochemical parameters were determined. Circulating IgY anti- eimeria HSP-70 recombinant antigen level was determined at 14 and 21 days post vaccination, by ELISA. FB1 alone and in combination with OTA caused significant reduction of relative weights of bursa, thymus and spleen, similarly the relative weight of kidneys and liver was significantly increased (p<0.05).Individual and combined effect cause significant reduction in hematocrit, erythrocytes,hemoglobin, leukocytes and lymphocytes,while significant increase of heterophils, monocytes and eosinophils were detected in a dose dependent manner (p<0.05).Biochemical profile indicated increase of the levels of urea, triglycerides, uric acid, creatinine, ALT, GGT and AST (p< 0.05). However, FB1 alone caused non-significant increase of AST in chicks of experimental group C, similarly significant reduction in glucose and protein in all experimental groups was noted. Results regarding IgY level at 14 and 21 days post FB1alone and OTA+FB1 feeding showed reduction (p<0.05) of total specific IgY in all experimental groups. In conclusion, based on the finding of experiment 1; chicks kept on low to higher doses of OTA-contaminated diet even OTA at 0.1mg/kg body weight, present pathological effects in many organs, depress growth and also depress immune system. Based on the finding of experiment 2, also subcutaneous OTA inoculation induces imunotoxicopathological effects similar to feed contamination, but with some differences in hematological parameters, that require further study. Based on the finding of experiment 3, FB1 alone or in combination with OTA presents the suppression of Eimeria vaccination response. Altogether, these datas suggest that the immunotoxicopathological effects of OTA alone or in combination to FB1 add more risks to chickens? health, induce hematological and biochemical alterations, decrease relative weight of lymphoid organs and increase relative weight of liver and kidneys, can induce failures in diagnosis based on determination of antibody levels and can present impact in vaccination programs, contributing to economic losses.
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