| Summary: | Trypanosoma cruzi é um parasito que exibe formas de vida com diferenças morfológicas e funcionais, alternando entre formas replicativas (epimastigota e amastigota) e infectantes (tripomastigota). De fato, a expressão gênica é a chave dessas diferenças. Ao contrário de outros eucariotos, as sequências que codificam proteínas estão organizadas em unidades de transcrição policistrônicas, que são convertidos em RNAm monocistrônicos por trans splicing no terminal 5' e poliadenilação na extremidade 3' do transcrito primário. Embora trans splicing seja um mecanismo preciso, existem casos em que são utilizados mais de um local aceptor de splicing no interior de uma região intergênica, podendo, portanto, gerar diferentes proteínas a partir de um mesmo gene, ou seja, ocorre um processamento alternativo do transcrito. Aqui, nós descrevemos o gene Tc8.2, que foi isolado de uma biblioteca de cDNA de formas tripomastigota em vetor lambda Zap. A sequência desse gene foi analisada em bancos de dados e a região C terminal foi clonada e expressa em sistema Gateway. O soro obtido da imunização de camundongos com a proteína recombinante foi utilizado para reagir com extratos proteicos de T. cruzi e houve o reconhecimento de polipeptídios de 70 kDa nas formas epimastigotas e de 80 kDa nas formas tripomastigotas. Além disso, pôde ser observada uma imunolocalização diferencial da proteína Tc8.2 nestas duas formas. Na forma epimastigota a proteína foi encontrada distribuída em todo citoplasma, enquanto que em tripomastigota essa distribuição ocorreu no núcleo e cinetoplasto. Estes resultados sugerem que as proteínas derivadas do gene Tc8.2 têm funções diferentes e possam estar relacionadas com a fase de desenvolvimento do parasito. Para caracterizar esse gene, foi realizado ensaios de Southern blot, indicando que se trata de um gene único ou em poucas cópias e o Northern blot havendo o reconhecimento de transcritos de tamanhos diferentes nas três formas de vida de T. cruzi (4,4 kb em epimastigotas e amastigotas e 3,0 kb em tripomastigotas), o que sugere a ocorrência de splicing alternativo na formação do RNA do gene Tc8.2. === Trypanossoma cruzi is a parasite that displays life forms with morphological and functional differences, alternating between replicative (epimastigote and amastigote) and infective (trypomastigote) forms. Indeed, gene expression is the key to these differences. Unlike other eukaryotes, the sequences encoding proteins are arranged in policistrônicas transcription units, wich are converted to monocistronic mRNAs by trans-splicing the 5end and polyadenylation at the 3end of the primary transcript. Although trans-splicing mechanism is precise, there are cases where they are used more than one splice acceptor site within an intergenic region can therefore generate different proteins from the same gene, or an alternative processing occurs transcript. Here, we describe the TC8.2 gene, wich was isolated from a cDNA library trypomastigote forms in vector lambda Zap. The sequence of this gene was analyzed in databases and the C-terminal region was cloned and expressed in Gateway system. From mice immunized with the recombinant protein was used to react with protein extracts of T.cruzi was recognized polypeptides of 70 kDa in epimastigotes and 80 kDa in trypomastigotes. In addition, a differential immunolocalization of Tc8.2 protein could be observed in these two ways. In order to epimastigote protein was found distributed throughout the cytoplasm, whereas this distribution in trypomastigote occurred in the nucleus and kinetoplast. These results suggest that protein derived from the gene Tc8.2 have different functions and may be related to the stage of development of the parasite. To characterize this gene was performed Southern blot assays, indicating that it is a single gene or a few copies and Northern blot analysis of transcripts there recognition of different sizes in the three forms of life oh T.cruzi (4.4 kb for epimastigotes and amastigote and trypomastigote to 3.0 kb), suggesting the occurrence of the formation of alternative splicing of RNA Tc8.2 gene.
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