Avaliação molecular de micoplasmas hemotrópicos e soroprevalência de Ehrlichia spp. em uma população de cães, equinos e humanos de assentamento rural na região norte do estado do Paraná

Devido à importância dos carrapatos na transmissão de hemoplasmas e Ehrlichia potencialmente zoonóticos, bem como a possibilidade de cães serem utilizados como sentinelas para infecções em humanos, os objetivos deste estudo foram i) determinar a prevalência de espécies de hemoplasmas utilizando ensa...

Full description

Bibliographic Details
Main Author: Rafael Felipe da Costa Vieira
Other Authors: Odilon Vidotto .
Language:Portuguese
Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. 2012
Online Access:http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000181603
Description
Summary:Devido à importância dos carrapatos na transmissão de hemoplasmas e Ehrlichia potencialmente zoonóticos, bem como a possibilidade de cães serem utilizados como sentinelas para infecções em humanos, os objetivos deste estudo foram i) determinar a prevalência de espécies de hemoplasmas utilizando ensaios de PCR em tempo real com SYBR® green e TaqMan®, ii) determinar a soroprevalência de Ehrlichia spp. utilizando um teste comercial de ELISA rápido e dois ensaios de imunofluorescência indireta (IFI) com antígenos brutos de E. canis e E. chaffeensis, iii) identificar as espécies de carrapatos parasitando cães e equinos, e iv) analisar os fatores de risco para infecção em uma população restrita de cães, equinos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos em um assentamento rural situado na região norte do Paraná. Um total de amostras de sangue de 132 cães, 16 equinos e 100 humanos foram coletadas. O DNA do gene constitutivo gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH) foi amplificado com sucesso em todas as amostras. Do total de amostras testadas, 59/132 (44,7%) cães foram positivos para hemoplasmas (41 M. haemocanis, 32 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', e seis 'Candidatus Mycoplasma turicensis'). Todos os humanos e equinos foram negativos para hemoplasmas. Das amostras de cães, 56/132 (42,4%) foram soropositivos para Ehrlichia canis. Dos equinos, 10/16 (62,5%) e 8/16 (50%) foram soropositivos pele ELISA comercial e IFI, respectivamente. Dentre os humanos, 5/100 (5%) foram soropositivos para E. canis e E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n=291, 97,98%), Amblyomma ovale (n=5, 1,68%) e A. cajennense (n=1, 0,34%) foram encontrados parasitando cães, enquanto que A. cajennense (n=25, 96,15%) and R. (Boophilus) microplus (n=1, 3,85%) foram encontrados em equinos. Cães >1 ano apresentaram mais chance de serem positivos para hemoplasmas e soropositivos para E. canis do que cães &#8804;1 ano (P < 0.05). Associação entre sexo, presença de carrapatos e presença de hemoplasmas ou soropositividade para Ehrlichia não foi observada (P > 0.05). Concluindo, embora infecções por hemoplasmas caninos e picadas de carrapatos sejam altamente prevalentes na área estudada, evidência de transmissão inter-espécies não foi observada. Anticorpos anti-Ehrlichia sp. foram encontrados em equinos; entretanto, a ausência de uma caracterização molecular impede qualquer conclusão sobre agente envolvido. Além disso, a alta soroprevalência de E. canis em cães e a evidência de anticorpos anti- Ehrlichia sp. em humanos, reforçam que os casos de erliquiose humana no Brasil possam ser causados por E. canis. === Due to the importance of ticks in the transmission of potentially zoonotic hemoplasmas and Ehrlichia sp., as well as the possibility that dogs might act as sentinels for human infections, the aims of the present study were to i) determine the prevalence of hemoplasma species using SYBR green and TaqMan real-time PCR assays, ii) determine the seroprevalence of Ehrlichia spp. using a commercial ELISA rapid test and two indirect immunofluorescent assays (IFA) with E. canis and E. chaffeensis crude antigens, iii) identify the tick species parasitizing dogs and horses, and iv) analyze risk factors for infection in a restricted population of dogs, horses and humans highly exposed to tick bites in a rural settlement located in the north region of Paraná State. A total of 132 dogs, 16 horses and 100 human blood samples were collected. DNA of the housekeeping gene glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was successfully amplified from all samples. From the total of samples tested, 59/132 (44.7%) dogs were positive for hemoplasmas (41 M. haemocanis, 32 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', and six 'Candidatus Mycoplasma turicensis'). All human and horse samples were negative for hemoplasmas. From dog samples, 56/132 (42.4%) dogs were seropositive for E. canis. From horses, 10/16 (62.5%) and 8/16 (50%) were seropositive by the commercial ELISA and IFA, respectively. Out of humans, 5/100 (5%) were seropositive for E. canis and E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n=291, 97.98%), Amblyomma ovale (n=5, 1.68%), and A. cajennense (n=1, 0.34%) were found parasitizing dogs, while A. cajennense (n=25, 96.15%) and R. (Boophilus) microplus (n=1, 3.85%) were found on horses. Dogs >1 year were more likely to be positive for hemoplasmas and seropositive for E. canis than dogs &#8804;1 year (P < 0.05). No significant association was found between gender or presence of ticks, and presence of hemoplasmas or seropositivity to Ehrlichia (P > 0.05). In conclusion, although canine hemoplasma infections and tick bites are highly prevalent in this area, no evidence for cross-species transmission was observed. Anti-Ehrlichia sp. antibodies were found in horses; however, the lack of a molecular characterization precludes any conclusion regarding the agent involved. Additionally, the higher seroprevalence of E. canis in dogs and the evidence of anti-Ehrlichia sp. antibodies in humans, reinforce that human cases of ehrlichiosis in Brazil may be caused by E. canis.