Avaliação do efeito da clorofilina na indução de apoptose, inibição da proliferação celular e expressão de RNAm dos genes CASP8, CASP9, APC e ß-catenina

• Main Author: Diogo Campos Vesenick
• Other Authors: Mário Sérgio Mantovani .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós- Graduação em Patologia Experimental. 2010
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000161924

A Clorofilina é um derivado semi-sintético da clorofila com propriedades antioxidante, antimutagênica, moduladora das enzimas metabolizadoras de xenobióticos e indutoras de apoptose em linhagens de células de câncer O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da clorofilina na indução de apoptose, inibição da proliferação celular e expressão gênica em células de adenocarcinoma de cólon retal humano HT29. A Clorofilina na concentração de 100µg/mL reduziu significativamente a sobrevivência celular após 48 horas e as concentração de 500 e 1000µg/mL após 24 horas, tanto no Ensaio de Citotoxicidade – MTT como na Cinética de Proliferação Celular. O efeito foi dose-dependente. Na avaliação da indução de apoptose nenhuma concentração de clorofilina após 24 horas de tratamento induziu apoptose. Na expressão gênica foi observado redução significativa da expressão de genes do ciclo celular APC e β-catenina (CTNNB1), mas não houve variação na expressão dos genes iniciadores de apoptose tanto pela via extrínseca CASP8 como pela via intrínseca CASP9. Os dados sugerem que a ação de inibição do crescimento celular produzido pela Clorofilina nas concentrações estudadas esta ligado diretamente à regulação da expressão gênica da β-catenina e não do APC, uma vez que este está mutado e inativo. Em relação a apoptose, as concentrações estudadas não demonstraram potencial indutor apoptótico, seja através da análise nas mudanças morfológicas das células ou através da modificação da expressão dos genes das caspases estudados. === Chlorophyllin is a semi-synthetic derivative of chlorophyll that possesses antioxidant and antimutagenic properties. It also modulates enzymes that metabolizes xenobiotics and induces apoptosis in cell cancer lineages. This study aims to evaluate the effects of chlorophyllin on apoptosis, cell proliferation and gene expression in cells of human colorectal adenocarcinoma HT29. Chlorophyllin at 100μg/mL significantly reduced cell survival after 48 hours, and concentrations of 500 e 1000µg/mL after 24 hours, both cytotoxicity test (MTT) and cell proliferation kinetics in a dose-dependent manner. In the evaluation of apoptosis induction, none of the concentrations of chlorophyllin induced apoptosis after 24 hours of treatment. Gene expression analysis resulted in significant reduction in the expression of cell cycle genes APC and β-catenin (CTNNB1), but there was no change in expression of initiators genes of apoptosis, both in extrinsic (CASP8) and intrinsic pathway (CASP9). The data suggest that the inhibitory effect of the tested concentrations of chlorophyllin is related to the regulation of gene expression of β-catenin rather than APC, since it is mutated and inactive. Regarding apoptosis, tested concentrations demonstrated no potential of apoptosis induction, as seen through the analysis of morphological changes of cells or by modification of caspases gene expression.