| Summary: | Os norovírus (NoV) são os maiores causadores de gastroenterites não-bacterianas em seres humanos no mundo todo, incluindo os casos associados com surtos de origem alimentar e veiculados pela água. Os membros da família Caliciviridae são vírus pequenos, ãoenvelopados e apresentam genoma de RNA fita simples positiva e poliadenilada. As noroviroses também têm sido encontradas em animais de produção como bovinos, suínos e ovinos. A detecção do RNA viral em suínos adultos assintomáticos em países da Europa, América do Norte, Australásia e América Latina tem levantado interesse na saúde pública, como a transmissão zoonótica dos NoV suínos aos seres humanos. Embora o papel do NoV suíno (PoNoV) ainda não esteja estabelecido nos países em desenvolvimento, estudos epidemiológicos têm demonstrado a ocorrência mundial dessa calicivirose nessa espécie animal. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi detectar NoV em amostras de fezes de animais assintomáticos em fase terminação (9-24 semanas de idade), em propriedades suinícolas (n=16) localizadas na cidade de Toledo, Estado do Paraná, Brasil. As amostras fecais (n=112) foram coletadas uma única vez em forma de pool diretamente das baias nos meses de Dezembro (2008) e Junho (2009) e estocadas a 4oC para posterior investigação. As reações de transcrição reversa seguida da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR) foram realizadas utilizando primers específicos desenhados para amplificar parcialmente a região Nterminal do gene que codifica a proteína do capsídeo do PoNoV. Os produtos de PCR apresentando 181pb de tamanho esperado foram purificados e a quantificação do produto amplificado foi realizada por meio de kits comerciais. O MegaBACETM foi utilizado para o sequenciamento, realizado com os primers forward e reverse. A análise de qualidade das sequências foram obtidas utilizando os softwares Phred e CAP3 e a procura de similaridades foi realizada com sequências depositadas no GenBank (BLAST). O alinhamento múltiplo e a matriz de identidade foram obtidas através do programa BioEdit. A árvore filogenética foi reconstruída a partir do algorítimo Neighbor-Joining, baseadas no modelo Poisson correction, com 1.000 replicações de bootstrap, utilizando-se o software MEGA 4. Oitenta e oito porcento (14/16) dos rebanhos investigados foram considerados positivos para a presença do NV. Além disso, em 51,8% (58/112) das amostras fecais foi verificada a presença do vírus. Setenta e dois porcento (5/7) das granjas brasileiras de terminação visitadas em 2008 tinham a circulação do NoV e todas as propriedades visitadas em 2009 (n=9) foram consideradas positivas para o PoNoV. A análise filogenética de sete sequências permitiu agrupar seis estirpes brasileiras do PoNoV no genogrupo II genotipo 11 (GII-11) e uma estirpe no GII-19, juntamente com outros isolados de PoNoV já caracterizados. Os resultados mostraram que o PoNoV está difundido nos rebanhos suínos incluídos neste estudo e uma alta frequência de infecção foi verificada em animais sem diarréia. Considerando o interesse da saúde pública sobre a transmissão zoonótica do PoNoV, esses resultados, obtidos em uma importante região brasileira de produção de suínos, evidenciam a importância de se realizarem futuros estudos epidemiológicos e moleculares em estirpes de NoV de origem suína. === Norovirus (NoV) is the major cause of human non-bacterial gastroenteritis worldwide including the cases associated with water and food-borne outbreaks. The members of Caliciviridae family are small non-enveloped viruses with a positive single stranded polyadenylated RNA genome. Noroviruses has also been found in farm animals such as cattle, pig and sheep. The detection of viral RNA from asymptomatic adult pigs in Europe, North America, Australasia and Latin America countries raises public health concerns such as zoonotic transmission of porcine NoV to humans. Although the role of porcine NoV (PoNoV) in developing countries has not been established, epidemiological studies have demonstrated the widespread occurrence of related caliciviruses in these animals worldwide. In this context, the aim of this study was to detect NoV in fecal samples of asymptomatic animals (9-24 weeks old) at fattening pig farms (n=16) located in Toledo, State of Paraná, Brazil. The stool samples (n=112) were collected once in pool form directly from pens in December, 2008 and June, 2009 and stored at 4oC for further investigation. Reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR) assays were performed using specific primers designed to target a partial N-terminal region of the gene that codify the capsid protein of PoNoV. Purification and quantification of PCR products were performed with commercial kits. MegaBACETM 1000 was used for sequencing, which was carried out with PCR forward and reverse primers. Sequence quality analysis was obtained using Phred and CAP3 software and similarity searches were performed with sequences deposited in GenBank using the BLAST. A multiple alignment and an identity matrix were produced in BioEdit. Phylogenetic tree was reconstructed using the Neighbor-Joining algorithm based on the Poisson correction model, with 1,000 replicates of bootstrap using the MEGA 4. A total of eighty-eight percent (14/16) of investigated farms were considerate positive for NoV presence. Besides, in 51.8% (58/112) of fecal samples was verified virus presence. Seventy-two percent (5/7) of Brazilian fattening herds visited in 2008 had NoV circulation and all farms visited in 2009 (n=9) were considerate positive for PoNoV. The phylogenetic analysis of seven sequences allowed to cluster six wild-type Brazilian PoNoV strains in genogroup II genotype 11 (GII-11) and one strain in GII-19, close with other already characterized PoNoV isolates. The results showed that the PoNoV is widespread in the pig herds included in this study and a high frequency of infection in animals without diarrhea was verified. Considering the public health concerns about zoonotic transmission of PoNoV these results, obtained in an important Brazilian porkproduction region, highlights for the importance to carry out further epidemiologic and
molecular studies in NoV strains of the porcine origin.
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