Resposta imune humoral em camundongos à sub-fração obtida por digestão enzimática (tripsina) do antígeno de alta massa molecular de Paracoccidioides brasiliensis

• Main Author: Juliana Rubira Gerez
• Other Authors: Eiko Nakagawa Itano .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimental. 2007
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000124161

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis que libera diversos componentes imunogênicos, dentre eles o de alta massa molecular (hMM). O objetivo desse trabalho foi obter a sub-fração do componente de alta massa molecular por digestão com tripsina, assim como avaliar a resposta imune humoral a este componente na paracoccidioidomicose experimental. Inicialmente a fração hMM (~380KDa) foi obtida por cromatografia em Coluna de Sephadex G - 200 e a seguir tratada com tripsina por 60', 120', 150' a 37ºC e re-analisada por Cromatografia em Coluna de Sephadex G 100. A sub - fração F17 -II selecionada foi analisada por SDS - PAGE e utilizada na imunização de camundongos BALB/c. A seguir foi analisado o nível de IgG anti-gp43 , anti-hMM e gp43 solúvel nos grupos experimentais de camundongos normal, imunizado, imunizado/infectado e infectado utilizando ELISA indireto e ELISA de captura. Os resultados obtidos demonstraram nível significativo de IgG anti - sub-fração F17 -II 28 e 56 dias pós imunização. No entanto não houve diferença significativa no nível de IgG anti-sub-fração F17 -II entre o grupo imunizado/infectado e infectado. Foi observado nível elevado de IgG anti - gp43 ou anti - hMM nos animais infectados em relação ao controle mas não entre infectados e imunizados/infectados. Concluímos pelo trabalho que a fração hMM de P. brasiliensis apresenta suscetibilidade à ação da enzima tripsina, podendo gerar dois fragmentos de massa molecular distintas em função do tempo de incubação. A F17-II resultante da digestão com tripsina apresenta massa molecular similar a gp43 e não é capaz de potencializar a resposta imune humoral na PCM experimental em camundongos por processo de imunização. === Paracoccidioides brasiliensis (Pb), the etiologic agent of a systemic mycosis, produces high molecular mass (hMM) antigens. The objective of this investigation was to obtain the sub - fraction from hMM antigens by trypsin digestion, as well as evaluate the humoral immune response to this component in the murine experimental PCM. The hMM fraction (~380KDa) was obtained by Sephadex G-200 cromatography and digested with trypsin at 37ºC during 60, 120, 150 min followed by cromatography on Sephadex G-100. Two fractions were obtained and the selected sub-fraction (F17-II) was analyzed by SDS-PAGE. Groups of BALB/c mice were immunized with F17-II and the levels of IgG anti- F17-II were analyzed in serum samples from 28 and 56 days post-immunization by ELISA. Additionally, groups of mice immunized/infected (i.v.) with 1 x 106 yeast cells (Pb18) and as controls only infected or inoculated with adjuvant or with PBS were used. After 56 days post-infection the levels of IgG anti-gp43, IgG anti-hMM and soluble gp43 were analyzed by indiret and capture ELISA. A significant high level of IgG to F17-II (p<0.001) was observed in 28 and 56 days post-immunization. The analysis of serum IgG anti- gp43, IgG anti-hMM and soluble gp43 demonstrated a higher level in the group of infected animals in relation to the control but not among immunized/infected and infected groups. In conclusion, the hMM antigen is susceptible to trypsin and at least two digestion products, one with MM ~ 43 kDa (F17-II) can be obtained. Also this sub-fraction F17-II doesn't present the capacity to increase the humoral immune response in murine PCM.