Detecção do coronavírus bovino em episódios de diarréia neonatal em rebanhos bovinos brasileiros

• Main Author: Danilo Tancler Stipp
• Other Authors: Amauri Alcindo Alfieri .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. 2007
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000121379

A diarréia neonatal é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em bezerros, determinando grandes prejuízos econômicos à pecuária leiteira e de corte em todo o mundo. As causas que determinam a diarréia neonatal bovina são complexas e multifatoriais. O coronavírus bovino (BCoV) é um importante agente etiológico das diarréias virais de bezerros. No entanto, a detecção do vírus a partir de amostras de fezes diarréicas é raramente investigada nos rebanhos bovinos brasileiros. Dados epidemiológicos quanto a freqüência da infecção do BCoV em rebanhos da América do Sul também são escassos. Além disso, a exigência de técnicas de diagnóstico sensíveis e específicas, como a RT-PCR, são fundamentais para o estabelecimento da real prevalência do BCoV em rebanhos bovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar aspectos epidemiológicos da infecção pelo BCoV em rebanhos bovinos brasileiros. A freqüência de detecção do BCoV foi avaliada a partir de amostras fecais diarréicas (n = 221) e não-diarréicas (n = 61) de bezerros com até 60 dias de idade provenientes de rebanhos leiteiros e de corte de quatro estados brasileiros (São Paulo, Paraná, Minas Gerais e Mato Grosso), correspondendo a três regiões geográficas (Sul, Sudeste e Centro-Oeste). A técnica de semi-nested PCR (SN-PCR) foi utilizada para a detecção da região altamente conservada do gene que codifica a nucleoproteína do BCoV. A taxa de detecção do BCoV nas amostras de fezes diarréicas (19,8%) foi significantemente superior (p=0,0027) que em fezes de consistência normal (3,2%). A infecção foi detectada em bezerros de todas as faixas etárias com maior prevalência (p= 0,0012) em animais com 16 a 30 dias de idade. Duas estirpes selvagens do BCoV, detectadas à partir de amostras de fezes diarréicas, foram isoladas em cultura de células de adenocarcinoma retal humano (HRT-18). As estirpes virais isoladas foram identificadas como BCoV por meio da visualização de efeito citopático característico do BCoV na cultura celular, pela SN-PCR, RFLP com a enzima Hae III, e seqüenciamento dos fragmentos amplificados na SN-PCR. A detecção do BCoV em infecções de bezerros provenientes de rebanhos de leite e corte em todas as regiões geográficas pesquisadas e o número de amostras diarréicas positivas para o BCoV demonstram que esta infecção entérica é uma importante causa da diarréia neonatal nos rebanhos bovinos brasileiros. === The neonatal diarrhea is one of the main causes of calf morbidity and mortality, and determines great economical losses to dairy and beef cattle herds worldwide. The causes of neonatal calf diarrhea are complex and multifactorial. The bovine coronavirus (BCoV) is an important etiological agent of viral diarrhea in calves, however, the detection of this virus in diarrheic fecal samples is rarely accomplished in Brazilian cattle herds. Epidemiological data on the frequency of BCoV infection in South America livestock farms is very limited. Moreover, the applicability of a sensitive and specific diagnostic technique such as RT-PCR is fundamental to not underestimating the real prevalence of BCoV. The aim of this study was to obtain some epidemiological data of the BCoV infections in Brazilian cattle herds. We evaluated the BCoV frequency in 282 fecal samples (221 diarrheic; 61 normal-control) from calves up to 60-days-old from beef and dairy cattle from four Brazilian States (São Paulo, Paraná, Minas Gerais, and Mato Grosso) corresponding three (South, Southeast, Center-west) geographical regions. A semi nested-PCR assay was used for detection of a highly conserved region of the BCoV nucleoprotein gene. The rate of BCoV detection in diarrheic fecal samples (19.8%) was significantly higher (p=0.0027) than in feces with normal consistency (3.2%). The infection was detected in all age groups evaluated with greater prevalence (p= 0.0012) in calves with 16 to 30-days-old. Two wild-type BCoV strains from calves with diarrhea were isolated in monolayers of human rectal tumor (HRT-18) cells. The isolated virus strains were identified as BCoV by characteristic cytopathic effect in cell culture, SN-PCR assay, RFLP with Hae III enzyme, and sequencing of the PCR-amplicons. The detection of the BCoV infection in beef and dairy calves from all geographical regions assessed, and the rate of BCoV positive diarrheic fecal samples showed that this enteric infection is an important cause of neonatal calf diarrhea in Brazilian cattle herds.