Estresse oxidativo em músculo esquelético de ratos com caquexia induzida por tumor de walker-256

• Main Author: Flávia Alessandra Guarnier
• Other Authors: Rubens Cecchini .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimental. 2006
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000119253

A caquexia é definida como uma síndrome de progressiva perda de peso, e persistente perda de massa magra. É característica freqüente de pacientes portadores de câncer e se caractreiza por perda maior que 10% da massa corporal total, sendo responsável por cerca de 22% dos óbitos em pacientes com doença maligna avançada. A perda maciça de massa muscular é responsável pela maior parte da perda de peso total e ocorre independentemente da ingesta alimentar ou absorção de nutrientes. Alguns grupos têm demonstrado que o estresse oxidativo moderado pode aumentar a degradação proteica através do superexpressão dos componentes da via ubiquitina-proteassoma. Entre as modificações induzidas pelas ERO, se incluem a carbonilação proteica, a peroxidação lipídica, e o consumo das defesas antioxidantes solúveis. Esse trabalho se propôs a esclarecer o envolvimento do estresse oxidativo no desenvolvimento da caquexia relacionada ao câncer, em músculo esquelético de ratos com a forma subcutânea do tumor de Walker-256. Para isso, foram utilizados ratos Wistar machos de 200-250g, com água e ração ad libitum. O primeiro grupo (n=6) recebeu inoculação subcutânea, no flanco direito, de 0,5 mL de PBS; o segundo grupo (n=18) recebeu implantação subcutânea no flanco direito de uma supensão células tumorais em 0,5 mL de PBS; e um terceiro grupo (n=6) foi inoculado com PBS e recebeu a mesma quantidade de ração previamente ingerida pelos animais inoculados com tumor, durante 14 dias. Nos dias 5, 10 e 14, após a inoculação do tumor, os animais foram pesados, decapitados, e o tumor cuidadosamente dissecado e pesado. O músculo gastrocnêmio esquerdo de cada animal foi rapidamente retirado para pesagem e armazenamento. Os músculos foram homogeneizados em tampão gelado, e submetidos às reações com o TBA, quimiluminescência estimulada por tert-butil, e quantificação das defesas antioxidantes solúveis. A implantação do tumor de Walker-256 levou à diminuição progressiva do peso corporal no 5º e 10º dias, que foi acompanhada pela progressiva perda de massa do músculo gastrocnêmio (2,9%, 12,3%, e 15,8% no 5º, 10º e 14º dias, respectivamente). Os animais que receberam a mesma quantidade de ração consumida pelos animais inoculados com o tumor apresentaram, em 14 dias, a mesma diminuição encontrada no grupo 5 dias, quando comparados ao controle (10.1 ± 1.55%). Os índices de massa muscular/massa corporal total observados foram: um aumento de 0,56 no grupo pair-fed, e diminuições de 0,27 no grupo 5º dia, 0,86 no grupo 10º dia, e 0,81 no grupo 14º dia. A lipoperoxidação, avaliada pela formação de TBARS, mostrou um aumento significativo no 10º dia, chegando a aproximadamente 2,5 vezes os valores encontrados no grupo controle. A QL estimulada por t-butil hidroperóxido mostrou aumento altamente significativo (p<0,001) em todos os grupos experimentais avaliados (5º, 10º e 14º dias), mostrando maior evidência no 5º dia após inoculação (pico de 6,23 Unidades Relativas de Luz) das células tumorais. === Cachexia is a wasting syndrome, characterized by progressive weight loss, generally asssociated to the cancer and other inflammatory diseases. Studies revealed increases on TBARS and CuZn SOD on hypothalamus of rats with cachexia induced by Walker-256 tumour. Other studies showed that moderate oxidative stress in skeletal muscle of tumour bearing rats enhanced protein degradation by the ubiquitin-proteasome proteolytic pathway. This work wanted to clarify the involvement of oxidative stress on skeletal muscle of rats with Walker-256 carcinosarcoma. For this purpose, male Wistar rats were inoculated subcutaneously with a suspension of tumour cells. On days 5, 10 and 14 after tumour implantation, the animals were weighed, killed by decapitation, and the tumour carefully excised and weighed. The gastrocnemius muscle was rapidly excised, weighed and stored at liquid nitrogen until use. Then, the muscles were homogenized in cold buffer and oxidative stress evaluated by the tiobarbituric acid reactive substances (TBARS), chemiluminescence induced by t-butyl (CL), and quantification of antioxidants defenses (TRAP, SOD, Glutathione). In addition, the oxidation of proteins was evaluated by amounts of carbonyl proteins. Our results revealed a progressive loss of body weight on 5th and 10th days after tumour implantation, what was accompanied by muscle mass loss. The levels of TBARS enhanced 2.5 times on 10th day. The CL increased significantly (p<0.001) in all experimental groups, showing proeminent elevation of lipid peroxidation on 5th day. The TRAP values decreased on 5th day, returning to control levels on 10th day. The Stress Index, calculated through total and oxidized glutathione concentrations, showed 2 and 3 times of enhacement on days 5 and 14, respectivelly. The SOD activity increased from 0.195 ± 0.01 USOD/mg of protein on 5th day, to 0.240 ± 0.03 USOD/mg of protein on 10th day. Carbonyl proteins increased either, although this enhacement has appeared only on 10th day, declining on day 14. The results revealed the involvement of oxidative stress on weight loss process of skeletal muscle with cachexia induced by Walker-256 tumour. In addition, the enhancement of carbonyl proteins could feed the proteolysis process and consequent promote reduction of muscle mass.