Caracterização de lipoproteína de baixa densidade (LDL) por meios espectroscópicos

• Main Author: Letícia Bonfante Sicchieri
• Other Authors: Lilia Coronato Courrol
• Language: Portuguese
• Published: Universidade de São Paulo 2012
• Subjects: Európio-Clorotetraciclina; lipoproteína de baixa densidade; Tioflavina T; Europium-Chlortetracycline; low density lipoprotein; Thioflavin T
• Online Access: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85134/tde-24082012-133902/

O presente trabalho tem como objetivo avaliar se o complexo Európio- Clorotetraciclina (EuCTc) ou o corante Tioflavina T (ThT) podem atuar como biossensores precisos e eficientes de colesterol numa fração específica, através de procedimentos simples. Para isso estudaram-se as propriedades ópticas do complexo EuCTc e ThT na presença da Lipoproteína de Baixa Densidade (LDL) em seu estado nativo e em seu estado oxidado. O primeiro estudo realizado verificou a melhor razão molar entre o Európio e a Clorotetraciclina, em seguida verificou-se a influência da diálise da LDL na emissão do complexo EuCTc, para obtenção de um protocolo para quantificação da concentração da LDL. Foram traçadas as curvas de calibração da emissão do complexo EuCTc com várias concentrações da LDL nativa, LDL oxidada com íons de Cobre e LDL oxidada com íons de Ferro. Em seguida obteve-se o tempo de vida do íon Európio no complexo EuCTc na presença de diferentes concentrações de LDL nativa e LDL oxidada por íons de Cobre. Na segunda parte do trabalho estudou-se a emissão do corante Tioflavina T na presença da LDL nativa e LDL oxidada. Na terceira etapa as propriedades ópticas dos biossensores EuCTc e ThT foram investigadas na presença do plasma sanguíneo e foram comparadas às emissões do complexo EuCTc e o corante ThT com a LDL ultracentrifugada, para verificar a possibilidade de quantificar a LDL diretamente no plasma sanguíneo. Na última etapa do trabalho desenvolveu-se uma nova metodologia para oxidar a partícula de LDL a partir da irradiação com laser de pulsos ultracurtos, a fim de produzir uma oxidação branda da partícula de LDL e controlada. === The present study aims at assessing the complex Europium-Clorotetracycline (EuCTc) or the dye Thioflavin T (ThT) can act as biosensors accurate and efficient in a specific fraction of cholesterol through simple procedures.For this purpose, it was studied the optical properties of Europium- Chlortetracycline (EuCTc) complex and the thioflavin T (ThT) dye in the presence of low-density lipoprotein (LDL) in native state and in oxidized state in vitro. First study realized it was verified the influence of dialysis in the emission of complex EuCTc in the presence of LDL, thereby producing a protocol for use of the complex to obtain the concentration of LDL. It was obtained the calibration curves of the complex with various concentrations of native LDL, the oxidized LDL with copper ions and oxidized LDL with iron ions. It was also obtained from the calibration curve of the emission of the complex in the presence of calcium interferent ion with the concentration found in blood plasma with the oxidized LDL with copper ions. It was obtained the lifetime of the europium ion in the complex in the presence of different concentrations of Native LDL and oxidized LDL by copper ions. In the second part of the work it was studied the emission of the dye thioflavin T in the presence of native LDL and oxidized LDL. In the third part the optical properties of biosensors EuCTc and ThT were investigated in the presence of blood plasma and compared to the emission of the complex EuCTc and the dye ThT with LDL ultracentrifugated to verify the possibility of quantifying directly LDL in blood plasma.In the final part of this work it has developed a new methodology for the LDL particles oxidation from the irradiation of ultrashort laser pulses in order to produce mild and controlled oxidation of the LDL particle.