Glicogênio sintase quinase3B e proteína precursora do amilóide em plaquetas de indivíduos com comprometimento cognitivo leve e doença de Alzheimer

• Main Author: Carolina Akkari Torres
• Other Authors: Orestes Vicente Forlenza
• Language: Portuguese
• Published: Universidade de São Paulo 2010
• Subjects: Biomarcadores; Doença de Alzheimer; Glicogênio sintase; Marcadores biológicos; Plaquetas; Proteína precursora do amilóide; Alzheimer disease; Amyloid precursor protein; Biological markers; Biomarkers; Glycogen synthase; Platelets
• Online Access: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5142/tde-12032010-143731/

A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa caracterizada pelo declínio progressivo da memória e de outras funções cognitivas, acometendo, sobretudo, indivíduos idosos. A anormalidade do metabolismo da proteína precursora do amilóide (APP) e a hiperfosforilação da proteína TAU são processos celulares característicos desta doença. A enzima glicogênio sintase quinase 3B (GSK3B) é altamente expressa no sistema nervoso central e apresenta grande importância na regulação da plasticidade neuronal e também nos mecanismos de sobrevivência celular. Estudos têm associado a GSK3B aos mecanismos que levam à formação das placas senis e dos emaranhados neurofibrilares na DA. Diante da dificuldade para se estabelecer com precisão o diagnóstico clínico da DA, sobretudo nas fases iniciais da doença, a identificação de biomarcadores se torna particularmente importante, principalmente em tecidos periféricos. Este trabalho avaliou, por meio de dois preparos distintos, dois possíveis candidatos a marcadores bioquímicos para a DA. Em plaquetas de pacientes com DA, comprometimento cognitivo leve (CCL) e idosos saudáveis, determinamos: (1) a razão de APP (APPr), que consiste na proporção entre fragmentos de 130kDa e 110kDa da APP; e (2) a expressão das formas fosforilada (fosfo-GSK3B) e total (total-GSK3B) da enzima GSK3B, possibilitando o cálculo da razão de GSK3B (fosfo-GSK3B/total-GSK3B). Ambas as razões foram avaliadas por Western Blot utilizando anticorpos específicos. Não observamos diferença estatisticamente significante nos valores de APPr entre os três grupos estudados (p=0,847). Para o cálculo da razão de GSK3B, foram necessárias adaptações do protocolo de preparo e análise de plaquetas, prevenindo a ativação plaquetária durante o procedimento, bem como a degradação do substrato pela ação de proteases e fosfatases presentes nesta matriz biológica; deste modo foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos nas médias de GSK3B total e da razão de GSK3B (p=0,05 e p=0,06 respectivamente). Não foi encontrada correlação entre a razão de APP e a razão de GSK3B. Contudo, a razão de GSK3B mostrou correlação com o desempenho em testes de memória, segundo o escore na bateria cognitiva CAMCOG. Estes resultados sugerem que a razão de GSK3B em plaquetas sinaliza algumas alterações biológicas que ocorrem na progressão do CCL para a demência na DA === Alzheimer\'s disease (AD) is a neurodegenerative disease characterized by progressive decline of memory and other cognitive functions, affecting mainly elderly. The abnormal metabolism of amyloid precursor protein (APP) and protein TAU hyperphosphorylation are cellular hallmarks of this disease. Glycogen synthase kinase 3B (GSK3B) is an enzyme highly expressed in the central nervous system and of great importance in the regulation of neuronal plasticity and also the mechanisms of cell survival. Studies have associated GSK3B with the mechanisms that lead to the formation of senile plaques and neurofibrillary tangles in AD. Given the difficulty to establish the precise clinical diagnosis of AD, especially in the early stages of the disease, identification of biomarkers is particularly important, especially in peripheral tissues. This work evaluated two candidate biochemical markers for AD, using two different preparations. We investigated the ratio between 130kDa and 110kDa APP fragments (APPr) and between phosphorylated and total GSK3B (phospho-GSK3B / total-GSK3B) in platelets of patients with AD and mild cognitive impairment (MCI), comparing their results with those from healthy older adults (controls). The expression of APP fragments and GSK3B was assessed by Western blot using specific antibodies. No statistically significant differences in APPr were found between the study groups (p=0.847). We found statistically significant differences in mean total GSK3B and GSK3B ratio across disgnostic groups (p=0.05 and p=0.06, respectively). APPr and GSK3B ratio were not correlated, but the latter parameter did correlate with the performance on memory tests, as shown by the CAMCOG sub-score. The present data indicate that platelet GSK3B ratio may indicate biological changes that occur in the MCI-AD continuum