Padronização da investigação laboratorial de anticorpos dirigidos contra fármacos em doadores de sangue e pacientes com anemia hemolítica imune

• Main Author: Fernanda Acedo Moretto Gonçalves
• Other Authors: Fabíola Traina
• Language: Portuguese
• Published: Universidade de São Paulo 2017
• Subjects: Anemia; Anticorpo; Fármaco; Hemólise; Antibody; Drug; Hemolysis
• Online Access: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17155/tde-10042018-154444/

Introdução: Anemias hemolíticas induzidas por fármacos (AHIF) são caracterizadas por uma anemia hemolítica imune após exposição a um fármaco. Testes sorológicos têm o potencial de confirmar a presença de anticorpo contra fármacos, mas a realização destes testes ainda é um desafio. Os anticorpos IgM e IgG envolvidos na AHIF são principalmente de dois tipos: fármaco-dependentes e fámaco-independentes. Os anticorpos fármaco-independentes reagem com os eritrócitos \"in vitro\" sem a presença do fármaco, e os resultados imunohematológicos são idênticos aos encontrados nas anemias hemolíticas autoimunes idiopáticas. Anticorpos fármaco-dependentes resultam em teste da antiglobulina direto (TAD) positivo e eluato negativo, os anticorpos só reagem \"in vitro\" com os eritrócitos na presença do fármaco. Indivíduos saudáveis podem desenvolver anticorpos contra fármacos, mesmo na ausência de anemia hemolítica. Os indivíduos podem ser sensibilizados durante exposição prévia a fármacos, exposição a antibióticos usados em ração animal, tanques de piscicultura, berçários de criação de suínos ou tratamento de mastite em bovinos. Estes indivíduos apresentam um maior risco de desenvolvimento de AHIF grave na ocasião de uma segunda exposição ao fármaco. Objetivos: Padronizar testes imunohematológicos para a detecção de anticorpos dirigidos contra fármaco-dependentes. Materiais e métodos: Amostras de 162 doadores de sangue foram submetidas a pesquisa de anticorpos fármaco-dependentes anti-cefalexina, anti-rifampicina e anti-diclofenaco de sódio. Amostra de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo foi investigada para detecção de anticorpos fármaco-dependentes anti-valsartana. Amostras de 8 pacientes com suspeita diagnóstica de AHIF foram investigadas para a presença de anticorpos contra os fármacos que foram prescritos ao paciente no período de duas semanas prévias ou até o momento em que a hemólise aguda foi constatada. Anticorpos fármaco-dependentes que reagem na presença do fármaco ligado covalentemente à membrana da hemácia, ou na presença do fármaco em solução, foram investigados em doadores de sangue (técnicas em gel) e em pacientes (técnicas em tubo e em gel). Resultados: Os testes laboratoriais detectaram a presença de anticorpo anti-valsartana no eluato de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo e a presença de anticorpo anti-ceftazidima no soro de um paciente com suspeita clínica de AHIF. A investigação de anticorpo anti-cefalexina e anti-rifampicina foi negativa em amostras de doadores de sangue. O teste laboratorial para investigação de anticorpo anti-diclofenaco de sódio não foi finalizado devido a presença de hemólise em hemácias sensibilizadas com o fármaco e após a adição do fármaco na solução de hemácias. Conclusão: A detecção de anticorpo anti-valsartana em um doador de plaquetas colhidas por aférese evidenciou a presença de anticorpo anti-fármaco na ausência de hemólise. A detecção de anticorpo anti-ceftazidima em amostra de um paciente com anemia hemolítica confirmou a suspeita clínica de AHIF. Reconhecer os sinais clínicos da AHIF precocemente e a disponibilidade de testes sorológicos é essencial para confirmação diagnóstica, orientação terapêutica e prevenção de uma hemólise potencialmente fatal. === Introduction: Drug-induced immune hemolytic anemia (DIHA) is characterized by immune hemolytic anemia following exposure to a drug. Serological testing has the potential to confirm the presence of anti-drug antibodies, but the testing is still a challenge. The IgM and IgG antibodies involved in DIHA comprise mainly two types: drug-dependent and drug-independent. Drug-independent antibodies react with erythrocytes in vitro without the presence of the drug, and the immunohematologic results are identical to those found in idiopathic autoimmune hemolytic anemias. Drugdependent antibodies induce positive direct antiglobulin tests (DAT) and negative eluates, and in vitro antibody reactions with erythrocytes are only detected in presence of the drug. Healthy individuals can develop antibodies against drugs even in the absence of hemolytic anemia. Individuals may be sensitized during previous exposure to drugs, exposure to antibiotics used in animal feed, fish culture ponds, swine nurseries or mastitis treatment in bovines. These individuals present higher risk of developing severe DIHA on the second exposition. Aims: To standardize immunohematological tests for detection of anti-drug dependent antibodies. Materials and methods: Samples from 162 blood donors were tested for anti-cephalexin, anti-rifampicin and antidiclofenac antibodies. Sample from one platelet apheresis donor with positive DAT was investigated for anti-valsartan drug-dependent antibody. Samples from 8 patients with suspected DIHA were investigated for the presence of antibodies directed against the drugs that were prescribed to the patient in the period of two weeks prior to or until the time when acute hemolysis was detected. Drug-dependent antibodies that react in presence of the drug covalently attached to the erythrocyte membrane, or in presence of the drug in solution were investigated in samples from blood donors (gel techniques) and from patients (tube and gel techniques). Results: Laboratory tests detected antivalsartan antibody in the eluate of an platelet apheresis donor with positive TAD and anti-ceftazidime antibody in the serum of a patient with clinical suspicion of DIHA. Investigation of anti-cephalexin and anti-rifampicin antibody was negative in blood donor samples. The laboratory test for anti-diclofenac antibody was not possible due to the presence of hemolysis in erythrocytes sensitized with the drug and when the drug in solution was added to the erythrocyte. Conclusion: The detection of anti-valsartan antibody in an platelet apheresis donor revealed the presence of an anti-drug antibody in the absence of hemolysis. Detection of anti-ceftazidime antibody in a patient with hemolytic anemia confirmed the clinical suspicion of DIHA. It is essential to recognizing early clinical signs of DIHA and have serological tests available for diagnostic confirmation, therapeutic guidance and prevention of potentially fatal hemolysis.