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Previous issue date: 2012-02-09 === Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná === The white mold disease, caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, responsible for large losses in soybean (Glycine max (L.) Merrill). The pathogen has more than 400 hosts and presents the formation of a resistance structure (sclerotia), difficulting the disease control, thus increasing the importance of the pathogen in Brazilian agriculture. The seeds are the main spreading disease means, a quickly and correct presence detection of the pathogen is important to control the white mold, especially for non-infested areas by the pathogen. In this study, 57 S. sclerotiorum isolates were morphological and pathologically characterized to assess variations within the specie. Also was developed a method to detect the pathogen directly from seed-soak liquor of infected soybean seeds, through PCR. The proposed method was compared to the traditional recommended methods. The pathogen isolates showed some morphological variations among themselves, as the number and weight of the formed sclerotia. Pathologically, were observed two and seven pathogenic levels second, respectively, the soybean inoculation on the stem and on the detached trifoliate leaves. By the detection method, it was possible to detect one seed artificially contaminated in the sample with 400 total seeds. In naturally contaminated seeds, was possible to detected the pathogen presence in a sample that, according to the method of incubation on paper roll and on Neon-S medium, respectively, presented 1 and 3 seeds contaminated in four hundred seeds. The proposed methodology is promising for the detection of S. sclerotiorum, however, requires optimization because many false negative results were obtained, mainly due to substances released by the seeds that inhibited the PCR reaction. The use of filter in the samples has presented as a possible tool to overcome the PCR inhibitors. For the optimization of the method, increase the size of seed samples, use of filters, others techniques such as nested PCR, Real-Time PCR and DNA probes can help overcome these difficulties. === O Mofo branco, doença causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, vem causando grandes prejuízos na cultura da soja (Glycine max (L.) Merrill) e, por apresentar mais de 400 hospedeiros e a formação de uma estrutura de resistência (escleródios), o seu controle torna-se difícil, aumentando a importância do patógeno para a agricultura brasileira. As sementes são o principal meio de disseminação da doença, detectar rápido e corretamente a presença do patógeno nas mesmas é importante no controle do Mofo branco, principalmente, para não infestar áreas isentas do patógeno. No presente trabalho, 57 isolados de S. sclerotiorum foram caracterizados morfológica e patologicamente para avaliar variações dentro da espécie. Também se desenvolveu uma metodologia de detecção do patógeno em sementes de soja embebidas, através de PCR diretamente do líquido de embebição das mesmas. Comparou-se a metodologia proposta com as tradicionais recomendadas para o patógeno. Os isolados do patógeno apresentaram algumas variações morfológicas entre si, como quantidade e peso dos escleródios formados. Patologicamente, foram verificados dois e sete níveis de patogenicidade segundo, respectivamente, a inoculação dos isolados na haste e em trifólios destacados de plantas de soja. Diretamente a partir do líquido de embebição das sementes, foi possível detectar uma semente artificialmente contaminada em 400 sementes totais. Em sementes naturalmente contaminadas, detectou-se a presença do patógeno em amostra que, segundo o método de incubação em rolo de papel e em Neon-S apresentava, respectivamente, 1 e 3 sementes contaminadas em quatrocentas totais. A metodologia proposta é promissora para a detecção de S. sclerotiorum, no entanto, necessita de otimização, pois muitos resultados falsos-negativos foram obtidos, principalmente devido a substâncias liberadas pelas próprias sementes que inibiram a reação de PCR. A utilização de um filtro nas amostras apresentou-se como uma possível ferramenta para driblar os inibidores de PCR. Para a otimização do método, técnicas como Nested-PCR, Real-Time PCR, utilização de sondas de DNA, aumento no tamanho de amostras de sementes e a utilização dos filtros podem ajudar a superar essas dificuldades.
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