Clonagem e expressão do gene da glicoproteína "E" do vírus da doença de Aujeszky em sistema de expressão Pichia pastoris

• Main Author: SILVA JÚNIOR, Luiz Cosme da
• Other Authors: CASTRO, Roberto Soares de
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal Rural de Pernambuco 2016
• Subjects: Suíno; Doença; Doença de Aujeszky; Pichia pastoris; Clonagem; Aujeszky's disease; Swine; Cloning; CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
• Online Access: http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/5745

Submitted by ([e-mail]) on 2016-10-18T13:57:04Z No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5) === Made available in DSpace on 2016-10-18T13:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 === Aujeszky's disease (AD) is caused by Suid Herpesvirus 1 (SHV1) and affects a wide variety of animals, the pig being the most important host. The DA has caused considerable direct and indirect economic losses to the pig industry worldwide, from the impact on production. The use of control measures using diagnostic test able to differentiate infected animals from vaccinated animals and removal of positive animals in the squad is key to controlling the spread of the virus. The use of vaccines for the gE gene deleted of SHV1 has been used to decrease clinical signs and virus transmission. Although some epitopes gE gene has already been cloned into the Pichia pastoris expression system, relative to the portion extramembranares epitopes using synthetic sequence (gEs) yeast codon optimized for this has not yet been cloned in this system. In this work this sequence was cloned and expressed in P. pastoris, which produced the recombinant antigen gEr. The gEs was cloned in strains X-33 and KM71H this yeast. The two strains were induced to express cloned gEr. The recombinant protein was detected in both clones by colony blot and visualized on SDS-PAGE gel, revealing a protein of approximately 50 kDa. === A Doença de Aujeszky (DA) é causada pelo Herpesvírus Suino 1 (SHV1), que acomete uma ampla variedade de animais, sendo o suíno o hospedeiro principal. A DA tem causado consideráveis perdas econômicas diretas e indiretas à indústria suinícola mundial, decorrentes do impacto na produção. O emprego de medidas de controle utilizando teste diagnóstico capaz de diferenciar os animais infectados dos animais vacinados e a retirada dos animais positivos do plantel é fundamental para controlar a disseminação do virus. O uso de vacinas deletadas para o gene gE do SHV1 tem sido utilizada para diminuir os sinais clínicos e a transmissão do vírus. Apesar de alguns epítopos do gene gE já terem sido clonados no sistema de expressão Pichia pastoris, a porção referente aos epítopos extramembranares, utilizando sequência sintética (gEs) códon otimizada para esta levedura, ainda não foi clonada neste sistema. Neste trabalho essa sequência foi clonada e expressa em P. pastoris, que produziu o antígeno recombinante gEr. O gEs foi clonado nas linhagens X-33 e KM71H dessa levedura. As duas linhagens clonadas foram induzidas a expressar gEr. A proteína recombinante foi identificada em ambos os clones por colloning blot e visibilizada em gel SDS-PAGE, revelando uma proteína de aproximadamente 50 kDa.