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Previous issue date: 2013-02-22 === Keratinase are proteolytic enzymes whose substrate are a group of fibers and insoluble proteins denominate keratin. Some several micro-organisms such as fungi are capable to produce keratinase and to hydrolyze disulfide bonds present in keratinous substrates. The aim of this study was to select a producer keratinase and develop an integrated system which combines production, extraction and purification of keratinase by extractive fermentation in aqueous two-phase system (ATPS), prepared with polyethylene glycol (PEG) and citrate salts. Were observed the fermentation with Aspergillus sp SIS 11 was the higher producer of keratinases (7.65 U / mL), which the best conditions for enzyme production showed feather 0.5% o and pH 9.0. An ATPS which is composed of 20% (w/w) PEG 400 molar mass (g/mol), pH 8.0, 20% (w / w) sodium citrate, provided the best conditions for extractive keratinase production. Promoting greater (purification) 7.41, partition coefficient 0.74 and enzyme recovery 503.6%. In extractive fermentation enzyme produced presented partition coefficient K = 1.39 and enzyme recovery 65.08%. The studied strain was effective for enzyme production and biotechnological potential to use in animal feed. === Queratinases são enzimas proteolíticas que tem como substrato um grupo de proteínas fibrosas e insolúveis denominadas queratinas. Alguns micro-organismos como fungos excretam queratinases capazes de hidrolisar as ligações peptídicas presentes na queratina, principal componente das penas de aves. Diante do contexto, o presente trabalho teve como objetivo selecionar um micro-organismo produtor de queratinases, bem como desenvolver um processo integrado de produção, extração e purificação da queratinase por fermentação extrativa em sistema de duas fases aquosas (SDFA), preparados com polietileno glicol (PEG) e sais citrato. A linhagem Aspergillus sp SIS 11 foi a melhor produtora de queratinases (7,65 U/mL), nas quais as melhores condições para produção da enzima apresentavam 0,5% de pena e pH 9,0. As melhores condições de extração das enzimas em SDFA foram obtidas com 20% de PEG com massa molar 400 (g/mol), pH 8,0, 20% (m/m) de citrato de sódio, promovendo assim aumento da pureza de 7,41, coeficiente de partição de 0,74 e recuperação de 503,6%. Na fermentação extrativa a enzima produzida apresentou coeficiente de partição K =1,39 e recuperação de 65,08%. A linhagem estudada mostrou-se eficaz para a produção da enzima e potencial biotecnológico para aplicação em ração animal.
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