AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA HspBP1 EM INFECÇÕES VIRAIS

• Main Author: Ceccim, Adrianne Del Fabro
• Other Authors: Rodrigues Junior, Luiz Carlos
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Franciscana 2018
• Subjects: HspBP1; HSV-1; HIV; Replicação viral; Viral replication; CNPQ::ENGENHARIAS
• Online Access: http://tede.universidadefranciscana.edu.br:8080/handle/UFN-BDTD/255; http://www.tede.universidadefranciscana.edu.br:8080/handle/UFN-BDTD/298

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Adrianne Del Fabro Ceccim.pdf: 4991781 bytes, checksum: d1128fe71a2a03c2beaa42a7847dfedb (MD5) Adrianne Del Fabro Ceccim.pdf.jpg: 3245 bytes, checksum: 583d4670e00da5b265b326517cddf626 (MD5) Previous issue date: 2011-03-29 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === Thousands of people die annually due to infections caused by some kind of virus, despite the large investment on development of technologies that improve the diagnostics and prognostics of virus diseases. However, there is a lack of methods for diagnosis that are more accurate, low cost and that handle problems such as the immunologic window, the bounds of different infection phases, as well as the low amount of virions. The Hsps 70 are molecular chaperones that are expressed in various situations of stress or heat, forming a highly preserved immunologic system. They are highly expressed in different kind of tumors and in some in almost all viral infections. In the same way, its co-chaperona, the heat chock protein 70 linked to protein 1 (HspBP1) is involved in tumors processes, such as the lung cancer and the neuroblastoma. Recently, it was identified as a marker for the prognostic of breast cancer. Despite having studies related to the expression of HspBP1 on cancers and on its prognostics, the studies of its expression in viral infections are rare. Due to the fact that this protein can be used as an indicator of cellular metabolic alteration and that the viral infection will induce the cellular stress, the modification of its expression during the viral cycle can predict a higher or lower replicative index. This property can be used as a tool in the viral diagnostic. The mainly objective of this study was to determine the pattern of expression of protein HspBP1 in cells that hosts HSV-1 (vero cells) in vitro using the Western-blotting and determine increasing or reduction on its expression. In addition, the levels of HspBP1 and antibodies agains HspBP1 in the serum of HIV infected people were analized by ELISA. The results in vitro showed that after the viral infection there was no different in the pattern of expression of the total protein, when analyzed by SDS-PAGE. However, using the Western-Blotting the expression of HspBP1 increased in the 48 hours after the infection, comparing with non-infected Vero cells. Seventy-two hours after infection the expression decreased. The results of HspBP1 protein by ELISA showed a significant increasing of this protein in the HIV infected group that also presented a high viral load and low number of T CD4+ lymphocytes, when compared with the groups with an undetected load of HIV infected and uninfected. Regarding the research of anti-HspBP1 the results showed an increase in serum protein from HIV infected people. In conclusion these results suggest that the expression of HspBP1 is increased in HIV infected people and it is followed by an increasing in antibody production against HspBP1 and decreasing in T CD4+ lymphocytes for high viral load. === Milhares de pessoas morrem anualmente por infecções causadas por algum tipo de vírus, mesmo que, nos últimos anos, se invista muito no desenvolvimento de tecnologias para aprimorar o diagnóstico e prognóstico de viroses. Entretanto, ainda existe uma carência de métodos diagnósticos mais sensíveis, de baixo custo, que contornem problemas como a janela imunológica, os limites de detecção em determinadas fases da infecção, assim como a baixa quantidade de vírions. As Hsps 70 são chaperonas moleculares que se expressam em várias situações de estresse e ou calor, constituindo um sistema genético altamente conservado, sendo altamente expressas em diversos tipos de tumores e em certos tipos de viroses. Do mesmo modo, a sua co-chaperona, a proteína de choque térmico 70 ligada à proteína 1 (HspBP1), está envolvida em processos tumorais, como no câncer de pulmão e no neuroblastoma, e recentemente, foi identificada como um marcador de prognóstico no câncer de mama. Embora existam estudos relacionando à expressão da HspBP1 no câncer e o prognóstico deste, os estudos de sua expressão em infecções virais são raros. Em razão dessa proteína poder ser utilizada como um indicador de alteração metabólica celular, e a infecção viral induzir estresse celular, a alteração de sua expressão durante o ciclo viral pode predizer um maior ou menor índice replicativo. Assim, essa propriedade pode ser utilizada como ferramenta no diagnóstico viral. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo determinar o padrão de expressão da proteína HspBP1 em células hospedeiras do vírus HSV-1 (células Vero) in vitro através da técnica de Western-blotting, avaliando um provável aumento ou diminuição da sua expressão. Além disso, quantificar a proteína HspBP1 e os anticorpos IgG anti-HspBP1 no soro de indivíduos HIV positivos através da técnica de ELISA. Os resultados demonstraram que após a infecção viral não houve diferença no padrão de expressão de proteína total, quando analisados por SDS-PAGE. No entanto, pela técnica de Western-Blotting, a expressão de HspBP1 apresentou aumento nas 48 horas após a infecção em comparação com células Vero não infectadas. Setenta e duas horas após a infecção, a expressão diminuiu. Os resultados da pesquisa da proteína HspBP1 pelo teste ELISA mostraram que houve um aumento significativo dessa proteína no grupo dos indivíduos infectados pelo HIV apresentando carga viral alta e contagem de linfócitos T CD4+ baixos quando comparado com os grupos dos infectados pelo HIV com carga viral indetectável e com os não infectados. Em relação a pesquisa de anticorpos IgG anti-HspBP1 os resultados mostraram que houve um aumento da proteína em indivíduos infectados pelo HIV. Assim, esses resultados sugerem que a expressão HspBP1 está aumentada em indivíduos infectados pelo HIV, seguidos por um aumento na produção de anticorpos contra a HspBP1 e redução dos linfóctios T CD4+ para uma carga viral elevada.