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Previous issue date: 2013-08-21 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES === This work aimed to perform the kinetic bioresolution of Morita Baylis Hillman
adducts (MBHA) using CALB lipase derived from Candida Antarctica fungus.
Initially three MBHA we synthesized using acrylonitrile and m e p nitro
benzaldehyde. Subsequently the respective acetates from MBHA were prepared
in high yields using acetyl chloride and TEA. Methodologies for bioresolution of
AMBH (obtained from nitro aldehydes m e p) were successfully developed
producing the R enantiomers with 99.9% of enantiomeric excess determined by
gas chromatography (using the beta cyclodextrin chiral column). However, using
the same methodology it was not possible performed the bioresolution of AMBH
derived from the o-benzaldehyde. To obtain the S enantiomers, the hydrolysis
reactions of esters obtained from biocatalysis were made and separated by liquid
chromatography. These hydrolysis reactions were carried out using K2CO3 and
methanol, yielding the S enantiomers with 100% and 10% of chemical yields and
86.8% and 97.48% of enantiomeric excesses respectively. Using the method of
Mosher through double derivatization chemical shift values obtained from 1H NMR
spectra generated a NORS> and NORS 0 <0, which indicates that the absolute
configuration of the asymmetric carbon of AMBH hydrolyzed by enzyme is R. The
values of [S] D derived from m and p nitro aldehydes (S configuration) are +37
and +30 degrees. The values of [S] D of S corresponding acetates are -7 and -9
degrees respectively. The AMBH obtained from the m nitro aldehyde were
bioavaliados in vitro in a R/S, R and S forms. The racemate was the most
effective on L. braziliensis promastigotes and the S enantiomer was the lowest
active. In the cell cytotoxicity analysis which were evaluated in the safe murine
macrophages, the racemate was the most cytotoxic and the S enantiomer the
less cytotoxic (some cytotoxicity were only observed at concentrations over 40
mg/mL) concluding that all evaluated compounds were more cytotoxic for L.
braziliensis parasite that the safe macrophage. === Nesse trabalho visou-se a bio-resolução cinética dos Adutos de Morita
Baylis Hillman (AMBH) utilizando a Lipase CALB derivada do fungo Candida
Antarctica. Inicialmente foram sintetizados três AMBH usando acrilonitrila e os
respectivos o, m e p nitrobenzaldeídos. Subsequentemente os seus respectivos
acetatos foram preparados em altos rendimentos, usando cloreto de acetila e
TEA. Foram desenvolvidas com êxito, metodologias para a bio-resolução dos
AMBH oriundos dos nitroaldeídos m e p, obtendo os enantiômeros R com
excessos enantioméricos de 99,9%, determinados pela técnica de cromatografia
gasosa, usando à coluna quiral beta ciclodextrina e fase móvel (N2). Porém
usando as metodologias acima não foi possível a bio-resolução do AMBH
derivado do o-benzaldeído. Para obter os enantiômeros S, foram feitas as
reações de hidrólise dos respectivos ésteres devidamente separados por
cromatografia líquida das reações de biocatálise. As reações de hidrólise foram
feitas usando K2CO3 e metanol, obtendo-se os enantiômeros S com rendimentos
químicos de 100% e 10% e excessos enantioméricos de 86,8% e 97,48%
respectivamente. Usando o método de Mosher através da dupla derivatização os
valores de deslocamentos químicos obtidos dos espectros de RMN1H geraram um
NORS>0 e NORS<0, o que demonstra que a configuração absoluta do carbono
assimétrico dos AMBH os quais a enzima hidrolisou é R. Os valores de [S]D
oriundos dos AMBH nitroaldeídos m e p (configuração R) são +37 e +30. Os
valores de [S]D dos correspondentes acetatos S são -7 e -9 respectivamente. O
AMBH oriundo do m-nitroaldeído nas formas R/S, R e S foram bioavaliados in
vitro. A mistura racêmica foi a que se apresentou mais efetiva sobre
promastigotas de L. braziliensis, e a substância S foi a que apresentou a menor
atividade. Na análise de citotoxicidade celular no macrófago sadio de murinos
observou-se que a mistura racêmica foi a mais citotóxica e o S o menos
citotóxico (citotoxidade apenas a partir da concentração de 40 Xg/mL)
constatando que todas as substâncias avaliadas foram mais citotóxicas para o
parasita do que para macrófagos.
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