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Previous issue date: 2015 === INTRODUÇÃO: A queimadura extensa pode evoluir com infecção grave
e sepse com aumento da morbidade e mortalidade. Ocorre um estado
contínuo de inflamação e o nível sérico de citocinas é elevado. Os
receptores do tipo Toll-Like são importantes receptores de células do
sistema imune inato que reconhecem antígenos. Portanto, existe a
necessidade da obtenção de perfil da expressão gênica da pele em
queimaduras extensas para análise inicial. OBJETIVO: Avaliar o perfil de
expressão de genes relacionados às vias de receptores Toll-Like em
amostras de cultura primária de queratinócitos humanos epidérmicos de
pacientes com queimadura grave. MÉTODOS: Após a obtenção de
fragmentos de pele viáveis com e sem queimadura, a cultura de
queratinócitos foi iniciada pelo método enzimático utilizando dispase
(Sigma-Aldrich) e Tripsina (Sigma-Aldrich). Após o estabelecimento da
linhagem celular, estas células foram tratadas com QIAzol Reagent®
(Qiagen) para a extração de RNA total. Este foi quantificado e analisado
quanto à pureza para se obter cDNA para a análise da expressão de 84
genes específico de vias TLR de placas de PCR Arrays (SA Biosciences).
RESULTADOS: Após a análise da expressão dos genes verificou-se que
21% destes genes estavam expressos diferencialmente, dos quais 100%
foram reprimidos ou hiporregulados. Dentre estes, os seguintes genes
(vezes de diminuição): HSPA1A (-58), HRAS (-36), MAP2K3 (-23),
TOLLIP (-23), RELA (-18), FOS (-16), e TLR1 (-6,0). CONCLUSÃO: O
perfil da expressão gênica da pele de pacientes com grande queimadura
mostrou 21% de genes alterados, destes 100% apresentaram-se
hiporregulados. === INTRODUCTION: Large burn injury can progress to severe infection and
sepsis with increased morbidity and mortality. There is a continuous state
of inflammation and serum levels of cytokines are high. The Toll-like
receptors are important receptors of the innate immune system that
recognize antigens. Therefore, a need exists for obtaining the gene
expression profile of the skin of extensive burns for initial analysis.
PURPOSE: To evaluate the expression profile of genes related to Toll
Like Receptors (TLR) pathways of human primary epidermal keratinocytes
(hKEp) of patients with severe burns. METHODS: After obtaining viable
fragments of skin with and without burn injury, culture hKEp was initiated
by the enzymatic method using Dispase (Sigma-Aldrich) and Trypsin
(Sigma-Aldrich). These cells were treated with Trizol® (Life
Technologies) for extraction of total RNA. This was quantified and
analyzed for purity for obtaining cDNA for the analysis of gene expression
using specific TLR pathways PCR Arrays plates (SA Biosciences).
RESULTS: After the analysis of gene expression we found that 21% of
these genes were differentially expressed, of which 100% were repressed or
hyporegulated. Among these, the following genes (fold decrease):
HSPA1A (-58), HRAS (-36), MAP2K3 (-23), TOLLIP (-23), RELA (-18),
FOS (-16), and TLR1 (-6.0). CONCLUSION: The gene expression profile
of skin of patients with large burn injury showed 21% altered genes, and
100% of them were downregulated.
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