Estudo comparativo : bioquimico e imunofarmacologico do veneno total, da crotoxina e suas isoformas de crotapotina e PLA2 de crotalus durissus terrificus. C. d. ruruima C.d. cascavella e C. d. collilineatus

• Main Author: Oliveira e Silva, Saraguaci Hernandez de
• Other Authors: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: [s.n.] 2006
• Subjects: Venenos - Crotalideos; Crotoxina; Camundongo; Junção neuromuscular; Serpentes
• Online Access: OLIVEIRA E SILVA, Saraguaci Hernandez de. Estudo comparativo: bioquimico e imunofarmacologico do veneno total, da crotoxina e suas isoformas de crotapotina e PLA2 de crotalus durissus terrificus. C. d. ruruima C.d. cascavella e C. d. collilineatus. 2006. 118p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/312865>. Acesso em: 6 ago. 2018.; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/312865

Orientador: Lea Rodrigues Simioni === Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas === Made available in DSpace on 2018-08-06T07:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OliveiraeSilva_SaraguaciHernandezde_D.pdf: 978243 bytes, checksum: 7e35557ec13bc4cdfff9957cdfcaf502 (MD5) Previous issue date: 2006 === Resumo: Este trabalho está dividido em três momentos, o primeiro trata-se de um estudo comparativo do efeito dos venenos brutos de Crotalus durissus terrificus; C. d. ruruima; C. d. cascavella e C. d. collilineatus, bem como da crotoxina e da crotamina sobre a junção neuromuscular. O veneno C. d. ruruima foi purificado pela primeira vez através de HPLC em uma coluna Protein Pack SW 300, onde foi obtida a crotoxina e a crotamina (os demais venenos já foram purificados e os dados publicados). O estudo neurotóxico foi realizado em duas preparações nervo-frênico diafragma de camundongo e biventer cervicis de pintainho. Dos experimentos realizados em mamíferos e aves obteve-se o efeito neurotóxico esperado nas concentrações de 10 mg/ml. Os venenos brutos e as crotoxinas das serpentes C. d. terrificus e C. d. ruruima em preparações de mamífero produziram aumento da amplitude seguido de bloqueio total da resposta contrátil, diferentemente dos venenos e das crotoxinas das serpentes C. d. cascaavella e C. d. collilineatus, que causaram apenas bloqueio total neuromuscular. Em preparações de aves os quatro venenos e crotoxinas estudados induziram bloqueio total, porém sem causar facilitação. As crotaminas-positivas, estudadas em nervo-frenico diafragma de camundongo das serpentes C. d. terrificus e C. d. ruruima, na concentração de 10 mg/ml, causaram efeito facilitatório retornando à amplitude controle após 120 min de incubação. Ao recombinar a crotoxina 10 mg/ml e crotamina 5 mg/ml houve o aumento da amplitude seguido de bloqueio total da resposta contrátil. Nas preparações ensaiadas em aves, apresentou um efeito facilitatório fugaz seguido de bloqueio neuromuscular total. No segundo momento, as isoformas de crotapotina e PLA2 isoladas a partir da crotoxina dos venenos das serpentes de C. d. terrificus, C. d. cascavella e C. d. collilineatus, foram ensaiadas em mamíferos e aves nas concentrações de 10 mg/ml. As crotapotinas e PLA2 isoladas não causaram diferenças significativas em relação ao controle em preparações de mamíferos. O mesmo não ocorrendo com as PLA2 testadas em aves que causaram bloqueio neuromuscular, efeito este não esperado. Após a recombinação (5 mg/ml crotapotina) + (5 mg/ml PLA2), o complexo crotoxina causou bloqueio neuromuscular total em ambas preparações. Na terceita etapa deste trabalho, foram produzidos antivenenos específicos contra o veneno bruto e crotoxina do veneno C. d ruruima e PLA2 do veneno de C. d. collilineatus. O título de anticorpos e a especificidade dos antivenenos produzidos foram avaliados por ELISA. A neutralização da atividade neurotóxica foi avaliada em preparações biventer cervicis de pintainho. A capacidade neutralizante dos antivenenos produzidos em coelhos foi comparável ao soro anticrotálico comercial contra o veneno e crotoxina na proporção 1:1. O veneno, a crotoxina e os antivenenos estudados induziram liberação de CK significativamente diferente do controle === Abstract: This work is divided at three moments, the first one if terrificus deals with a comparative study of the effect of the crude venoms of Crotalus durissus; C. d. ruruima; C. d. cascavella and C. d. collilineatus, as well as of the crotoxin and the crotamine on the junction neuromuscular. Venoms C. d. ruruima was purified for the first time through HPLC in a column Protein Pack sw 300, where it was gotten the crotoxin and the crotamine (the too much venoms already had been purified and the published data). The neurotoxic study nerve-frênico was carried through in two preparations diaphragm of mouse and to chick biventer cervicis. The experiments carried through in mammals and birds the waited neurotoxic effect in the was gotten concentrations of 10 mg/ml. The crude venoms and the crotoxin of rastnaks C. d. terrificus and C. d. ruruima in preparations of mammal had produced increase of the followed amplitude of complete blockade of the contractil reply, differently of the venoms and the crotoxin of rastnakes C. d. cascavella and C. d. collilineatus, that they had caused only complete blockade to neuromuscular. In preparations of birds the four studied venoms and crotoxin had induced complete blockade, however without causing facilitation. The crotamine-positive, studied in nerve-frenico diaphragm of mouse of snakes C. d. terrificus and C. d. ruruima, in the concentration of 10 mg/ml, had caused facilitatori effect returning to the 120 after amplitude have controlled min of incubation. When crotoxin being recombined 10 mg/ml and 5 crotamine mg/ml had the increase of the followed amplitude of complete blockade of the contractil reply. In the preparations assayed in birds, fast followed of blockade presented a facilitatori effect to neuromuscular complete. At as the moment, isoforms of isolated crotapotin and PLA2 from the crotoxin of the venoms of the rastnakes of C. d. terrificus, C. d. cascavella and C. d. collilineatus, had been assayed in mammals and birds in the concentrations of 10 mg/ml. Isolated crotapotin and PLA2 had not caused significant differences in relation to the control in preparations of mammals. The same not occurring with the PLA2 tested in birds that blockade caused to neuromuscular, effect this not waited. After the recombination (5 mg/ml crotapotin) + (5 mg/ml PLA2), the crotoxin complex caused blockade to neuromuscular complete in both preparations. In the third stage of this work, specific antivenoms against crotoxin the crude venoms and of C. d. ruruima had been produced and PLA2 of the poison of C. d. collilineatus. The heading of antibodies and the especific of the produced antivenoms had been evaluated by ELISA. The neutralization of the neurotoxic activity was evaluated in preparations to chick biventer cervicis. The neutralizing capacity of the antivenoms produced in rabbits was comparable to commercial the anticrotalic serum against the venoms and crotoxin in ratio 1:1. The venoms, the crotoxin and the antivenoms, studied had induced significantly different release of CK of the control === Doutorado === Doutor em Farmacologia