Análise de transcriptoma post-mortem de cérebro de Mus musculus submetidos aos diferentes tipos de eutanásia preconizados pela Comissão de Ética no Uso Animal

• Main Author: Carvalho, Camila Xavier de
• Other Authors: Pic-Taylor, Aline
• Language: Portuguese
• Published: 2017
• Subjects: Expressão gênica; Animais - experimentação; Animais - eutanásia
• Online Access: http://repositorio.unb.br/handle/10482/23704

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. === Submitted by Raquel Almeida ([e-mail]) on 2017-06-20T19:51:33Z No. of bitstreams: 1 2017_CamilaXavierdeCarvalho.pdf: 1778759 bytes, checksum: 82b8a24841090d839f86a39a274d63c8 (MD5) === Approved for entry into archive by Raquel Viana ([e-mail]) on 2017-06-20T20:01:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_CamilaXavierdeCarvalho.pdf: 1778759 bytes, checksum: 82b8a24841090d839f86a39a274d63c8 (MD5) === Made available in DSpace on 2017-06-20T20:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_CamilaXavierdeCarvalho.pdf: 1778759 bytes, checksum: 82b8a24841090d839f86a39a274d63c8 (MD5) Previous issue date: 2017-06-20 === Eutanásia significa morte sem dor ou sem sofrimento, existem diversas técnicas preconizadas para tal objetivo. A eutanásia em animais tem seus procedimentos regulamentados pela Lei 11.794/08, da resolução do Conselho Federal de Medicina Veterinária (CFMV) nº714/02 e CONCEA/2015. A experimentação animal tem grande importância nas pesquisas científicas, contribuindo para o desenvolvimento da ciência e da tecnologia. Animais de várias espécies são utilizados como cobaias, sendo os camundongos os mais utilizados e os mais conhecidos cientificamente. O método de eutanásia em um estudo in vivo é uma importante escolha e deve seguir as orientações das associações internacionais que regulamentam a eutanásia como uma morte humanitária. A escolha de um método de eutanásia está relacionada à facilidade do método, seu baixo custo, eficácia, disponibilidade e baixo risco ao manipulador. Porém, todas estas qualidades não comprovam que o método de escolha seja o que menos causa sofrimento ao modelo experimental. O objetivo do estudo foi comparar a expressão gênica diferencial de cérebro de Mus musculus post-mortem através de estudo em larga escala de genes diferencialmente expressos em diferentes tipos de morte. Para tanto testou-se cinco diferentes metodologias de eutanásia: deslocamento cervical, guilhotina, overdose de xilazina/quetamina, overdose de tiopental e câmara CO2 em camundongos C57BL/6J. Dividiu-se os animais em cinco grupos de quatro indivíduos e após a eutanásia e constatação da morte seus cérebros foram coletados e RNA total extraído com uso do kit IllustraRNASpin GE. Todas as amostras de RNA passaram por avaliação de qualidade e concentração. O ensaio de microarranjos utilizou-se GeneChip® MoGene 2.0 ST Array Affymetrix (Santa Clara, CA, EUA) e GeneChip Scanner 7G Affymetrix. Observou-se 4.780 genes diferencialmente expressos no tecido cerebral para todos os tipos de morte e, entre estes, 65 descritos na literatura como gene expressos em situação de dor (PainGenesdb). Destes, quatro - Gfra2, Glra2, Grasp e Stoml3 – apresentaram diferenças significativas quando as metodologias foram comparadas par a par. Os métodos físicos (guilhotina e deslocamento cervical) apresentaram menores tempos de IMCO, CO2 tempo intermediário e xilazina/quetamina o maior desvio padrão para tempo de morte. Para tanto, este estudo observou que a eutanásia com deslocamento cervical foi método com melhor reprodutibilidade seguida da decapitação por guilhotina e que as metodologias de eutanásia estudada são similares desde que bem executadas. === Euthanasia means death without pain or without suffering, several techniques exist extolled for such an objective. The euthanasia in animals has their procedures regulated by the Law 11.794/08, of the resolution of Federal Council of Medicine Veterinary (CFMV) nº714/02 and CONCEA /2015. The animal experimentation has great importance in the scientific researches, contributing to the development of the science and of the technology. Animals of several species are used as animals tests, being the mice the more used and the more acquaintances scientifically. The euthanasia method in a study in vivo is an important choice and it should follow the orientations of the international associations that regulate the euthanasia as a humanitarian death. The choice of an euthanasia method is related to the easiness of the method, his/her low cost, effectiveness, readiness and low risk to the manipulator. However, all these qualities don't prove that the choice method is what fewer causes suffering to the experimental model. The objective of the study was to compare the expression differential gênica of brain of Mus musculus post-mortem through study in wide scale of genes diferencialmente expressed in different death types. For so much it was tested five different euthanasia methodologies: cervical displacement, guillotines, xilazina / quetamina overdose, tiopental overdose and camera CO2 in mice C57BL/6J. We divided the animals in five groups of four individuals and after the euthanasia and verification of their death brains they were collected and RNA extracted total with use of the kit IllustraRNASpin GE. All of the samples of RNA went by quality evaluation and concentration. The microarranjos rehearsal was used GeneChip® MoGene 2.0 ST Array Affymetrix (Santa Clara, CA, USA) and GeneChip Scanner 7G Affymetrix. It was observed 4.780 genes diferencialmente expressed in the cerebral fabric for all of the death types and, among these, 65 described in the literature as gene expressed in pain (PainGenesdb) situation. Of these, four - Gfra2, Glra2, Grasp and Stoml3. they presented significant differences when the methodologies were compared equal to equal. The physical (he/she guillotines and cervical displacement) methods presented smaller times of IMCO, CO2 intermediate time and xilazina / quetamina the largest standard deviation for time of death. For so much, this study observed that the euthanasia with cervical displacement was method with better reprodutibilidade following by the decapitation for guillotine and that the methodologies of studied euthanasia are similar since well executed.