Investigação da atividade do benzoato de tributilestanho e do iodeto de tributilestanho em receptores ativados por proliferadores peroxissomais e receptores de glicocorticóide

• Main Author: Silva, Nadyellem Graciano da
• Other Authors: Amato, Angélica Amorim
• Language: Portuguese
• Published: 2015
• Subjects: Obesidade; Desreguladores endócrinos; Tributilestanho; Obesogênicos
• Online Access: http://repositorio.unb.br/handle/10482/18766; http://dx.doi.org/10.26512/2015.08.D.18766

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. === A incidência e a prevalência de sobrepeso e obesidade têm aumentado bastante nas últimas décadas, em quase todos os países. Este fenômeno não é explicado apenas por mudanças do estilo de vida, o que levou a considerar a influência de outros fatores, como os chamados desreguladores endócrinos, e mais especificamente os obesogênicos ambientais. O tributilestanho (TBT) é um produto químico tóxico utilizado para vários fins industriais, tais como desinfecção de águas de refrigeração industrial, preservação de madeira, agentes anti-incrustantes em tintas de barcos e, portanto, está amplamente presente, e em níveis consideráveis, no ecossitema marinho e na água doce. O cloreto de TBT já é conhecido por desempenhar atividade desreguladora endócrina e influencia, inclusive, a diferenciação de adipócitos ex vivo e in vivo; no entanto, os demais compostos da família dos organoestânicos são pouco estudados. Diante disso, a proposta deste trabalho foi investigar a ação do benzoato e do iodeto de TBT nos receptores nucleares mais relevantemente envolvidos na adipogênese, o PPARγ, o RXRα e o GRα, e também sobre a diferenciação de adipócitos em cultura, com a utilização de pré-adipócitos murinos 3T3-L1 e células mesenquimais murinas C3H10T1/2. A influência do benzoato e iodeto de TBT sobre sobre a atividade transcricional dos receptores nucleares estudados foi investigada por meio de ensaios de gene repórter em células HeLa. Para a investigação de seu efeito sobre a adipogênese, células 3T3-L1 foram induzidas a diferenciar-se em adipócitos com insulina e tratadas por 10 dias com veículo, rosiglitazona ou os DEs testados, e as células C3H10T1/2 foram induzidas a diferenciar-se em adipócitos com isometilbutilxantina, insulina e dexametasona e tratadas por 10 dias com veículo, rosiglitazona ou com os DEs testados. A diferenciação em adipócitos foi determinada pela coloração de lipídeos intracelular com óleo vermelho O e pela expressão do RNAm do gene que codifica a proteína ligadora de ácidos graxos adipocitária (Fabpa). Foi observado que o benzoato e iodeto de TBT induziram a atividade transcricional do PPARγ e do RXRα nas maiores concentrações testadas, de forma comparável ao organoestânico já descrito como agonista destes receptores, o cloreto de TBT. Não houve indução da atividade transcricional do GRα por nenhum dos TBTs testados. Consistentemente com sua atividade agonista parcial em PPARγ e RXRα, o benzoato e iodeto de TBT induziram aumento do acúmulo lipídico intracelular e da expressão de Fabpa nos pré-adipócitos 3T3-L1, nas menores concentrações testadas, em comparação com as células tratadas com veículo, porém menos acentuado em relação ao observado nas células tratadas com rosiglitazona. Nas células mesenquimais C3H10T1/2, foi observado aumento do acúmulo lipidico intracelular e da expressão de Fapba em resposta às maiores concentrações testadas de benzoato e iodeto de TBT, também menos acentuado em comparação com o observado nas células tratadas com rosiglitazona. Em conjunto, os resultados sugerem que o benzoato e o iodeto de TBT apresentam potencial adipogênico fraco, por mecanismos dependentes de PPARγ e RXRα. === The incidence and prevalence of overweight and obesity have increased dramatically over the last decades, almost in every country. Because this is not solely explained by chanes in lifestyle, it is considered that other factors, such as endocrine disrupters that act as environmental obesogens may play arole. Tributyltin (TBT) is a toxic chemical used for varied industrial purposes, such as disinfection of industrial refrigeration water, wood preservation, as anti-incrusting agents in boats and is therefore widely present in the marine ecosystem and sweet water at significant levels. TBT chloride is know for its endocrine disrupting activity and has been shown to influence adipocyte differentiation both ex vivo and in vivo. However, other organostannic compounds have been poorly studied. Therefore, the aim of this work was to investigate the activity of TBT benzoate and iodide on nuclear receptors which play a major role on adipocyte differentiation, PPARγ, RXRα and GRα, and also on adipocyte differentiation in culture, by using murine 3T3-L1 preadipocytes and murine C3H10T1/2 mesenchymal cells. The influence of TBT benzoate and iodide on the transcriptional activity of nuclear receptors was investigated with reporter gene assays in HeLa cells. For the investigation of their effect on adipogenesis, 3T3-L1 were induced to differentiate in adipocytes with insulin and treated for 10 days with vehicle, rosiglitazone and the endocrine disrupters. C3H10T1/2 cells were induced to differentiate with isomethylbutylxanthine, insulin and dexamethasone and treated for 10 days with vehicle, rosiglitazone and the endocrine disrupters. Adipocyte differentiation was assessed by oil red O staining of intracellular lipid and by the expression of adipocyte fatty acid binding protein mRNA (Fabpa). Both TBT benzoate and iodide induced the transcritptional activity of PPARγ and RXRα at the higher concentrations tested, comparably to TBT chloride, the organostannic compound that was previously described as a partial PPARγ and RXRα agonist. Neither compounds induced GRα transcriptional activity. In keeping with their partial agonist activity on PPARγ e RXRα, TBT benzoate and iodide increased intracellular lipid accumulation and Fabpa expression in 3T3-L1 preadipocytes, at the smaller concentrations tested, when compared to vehicle-treated cells, although to a lesser extent than in rosiglitazone-treated cells. In C3H10T1/2 mesenchymal cells, both endocrine disrupters induced an increase in intracellular lipid accumulation and Fapba at the higher concentrations tested, also to a lesser extent that in rosiglitazone-treated cells. Taken together, these findings suggeste that TBT benzoate and iodide have a weak adipogenic potential, possibly by PPARγ and RXRα-dependent mechanisms.