| Summary: | Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. === Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-07-05T13:19:18Z
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2013_HarryMoralesDuque.pdf: 4746729 bytes, checksum: ed7f8beb39d7b64ee26f813c8d6ac30a (MD5) === As peçonhas escorpiônicas têm sido alvo de pesquisas por possuírem componentes com diversas atividades biológicas, as quais são responsáveis pelas alterações fisiológicas observadas no escorpionismo. Dentre esses componentes, estão as toxinas que agem em canais para potássio (KTxs), as
quais têm sido caracterizadas e divididas em subfamílias segundo a sua
estrutura primária. O objetivo desta pesquisa foi procurar novas KTxs na
peçonha do escorpião colombiano Tityus sp. utilizando duas estratégias: a
transcritômica e a proteômica. Uma biblioteca de cDNA foi construída, a partir da glândula de peçonha do escorpião e da sua peçonha foram isoladas e caracterizadas KTxs por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF/TOF e tipo ESI. Os peptídeos isolados foram testados por meio da técnica eletrofisiológica de patch clamp (whole cell). A partir da biblioteca de cDNA, foram caracterizadas cinco sequências precursoras que codificam prováveis KTx: três delas são pertencentes à subfamília α-KTx15, uma à subfamília α-KTx12 e uma à
subfamília α-KTx18. Da peçonha, foram sequenciadas outras quatro KTxs com
massas moleculares de 2430, 3590, 3640 e 4171 Da. Estas KTxs foram + capazes de diminuir a corrente de K em células do gânglio dorsal de ratos. A caracterização destas novas KTxs reflete o amplo espectro de expressão deste tipo de toxinas e as variadas estratégias moleculares utilizadas pelos escorpiões para produção de componentes neuroativos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT === The venom scorpions have been object of investigations by its different
activities biological from components, which are responsible by the physiologic
alterations observed in the scorpionism. Within these components, the toxins
that target potassium channels (KTxs) are present, which have been
characterized and divided according primary structure. The aim was search new
KTxs in the Colombian scorpion Tityus sp. venom using two strategies: the
transcriptomic and proteomic. The scorpion venom gland a cDNA library was
constructed, and from venom, KTxs were characterized using high performance
liquid chromatographic (HPLC), mass spectrometry MALDI-TOF/TOF and ESI
type technical. The isolated peptides were tested with patch clamp (whole cell)
electrophysiological technique. Four precursors likely KTxs were characterized:
three α-KTx15, one α-KTx12 and one α-KTx18 like subfamilies. Additionally,
four KTxs-like were sequenced from scorpion venom with molecular masses
2430, 3590, 3640 and 4171 Da. These slightly decreased levels potassium
current on dorsal root ganglion. The characterization these new KTxs reveals a
wide spectrum of KTxs-type toxins and one varied molecular strategy for
neuroactive compounds production also.
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