Plasma rico em plaquetas na cicatrização cutânea de gatos: padronização de técnica e aplicação clínica

• Main Author: Bertoletti, Bianca
• Other Authors: Raiser, Alceu Gaspar
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Santa Maria 2017
• Subjects: Felinos; Feridas cutâneas; Adjuvante da cicatrização; Cats; Skin wounds; Healing adjuvant; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
• Online Access: http://repositorio.ufsm.br/handle/1/4118

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === In cats, cutaneous healing presents qualitative and quantitative differences in comparison with another species, that seems predispose them to healing problems. Wounds that heal by first intention present less resistance, rate of contraction and epithelization. In the second intention healing, the inflammatory phase is bland and the proliferative phase has slow appearing and progression. Considering these aspects, it becomes important to search ways to promote and conduce cutaneous wound healing in cats. The aims of this study were standardize a technique to obtain autologous platelet-rich plasma (PRP) in cats and evaluate your effect on cutaneous healing of experimentally produced wounds in this species. The experiment was developed in two stages: three manual protocols to produce autologous platelet-rich plasma in cats were compared in the first stage. Fifteen adult healthy indoor cats, randomly divided into three groups, were utilized. Five samples of 4.5 ml of jugular blood were collect, with a vacuum system, sequentially in citrated tubes from each cat. The samples were processed using double centrifugation protocols (P): P1 (113g 10 minutes; 652g 5 minutes); P2 (400g 10 minutes; 800g 10 minutes); P3 (400g 10 minutes; 600g 10 minutes). Platelet concentration obtained in PRP obtained in different protocols and the ratio of PRP and platelet counts were compared by t-test. The feasibility of the collect method to the species and ease of execution of techniques was evaluated too. In the second stage, ten healthy adult indoor cats were used. In each animal were surgically produced four circular skin defects, with a diameter of 1 cm, on left and right sides of trunk dorsal midline. The lesions on one side were treated with fluid PRP, obtained of animal itself, according to the best protocol defined in the first stage of the experiment. The control defects in the opposite side were filled with NaCl 0,9% sterile solution. Three observers evaluated the wounds, every three days, for 28 days. The presence of crusts, pain, swelling, exudate, granulation tissue and the color were considered. The results were statistically evaluated by Mann-Whitney rank test. The area of each lesion was analyzed by morphometry every seven days and the data compared by t-test. Skin fragments with normal and scar tissue, from two more cranial lesions (treated and control), were obtained weekly. The fragments were stained with hematoxylin-eosin (HE) and Masson's trichrome, and qualitatively evaluated for the presence of crust, ulcer, acanthosis, fibroplasia, collagen deposition and neovascularization. These data were analyzed using the Mann-Whitney rank test. The collect method was satisfactory and simplified the procedure. Two techniques (P2 and P3) were effective to produce PRP, yielding concentrations higher than 1x106 platelets.μL-1. The P3 protocol was statistically higher in capacity increase, and was selected for use in experimental wounds. In the second stage, the techniques for blood collection, and the selected protocol, were satisfactory. The use of PRP in liquid form, deposited directly on the lesion, made it easy to use. Clinically, there was a statistically significant difference (p = 0.025) and higher exudation in wounds treated to three days. In morphometric analysis we noticed a greater contraction in wounds treated with PRP, especially of the first seven days (p = <0.001). Histopathological evaluation was not significant in any compared parameters. Therefore, it is concluded that the sampling method is efficient and P2 and P3 protocols can be considered feasible to obtain PRP from cats. The protocol P3 was superior in the platelet concentration ability, producing a better quality PRP. Activation of PRP liquid by tissue injury is possible. The increased exudation suggests enhancement of the inflammatory process in treated wounds. Therapeutic use of liquid PRP improves contraction capacity on experimental wounds in cats, despite the absence of histological evidence by way the evaluation adopted. === A cicatrização cutânea em gatos possui diferenças qualitativas e quantitativas quando comparada à de outras espécies, fato que parece predispor a problemas. Feridas que cicatrizam por primeira intenção apresentam menor resistência, taxa de contração e epitelização. Já na cicatrização por segunda intenção, a fase inflamatória é branda e a fase proliferativa apresenta surgimento e progressão lenta. Tendo em vista esses aspectos, torna-se importante a busca de meios que ajudem a favorecer e conduzir o reparo de feridas cutâneas em gatos. Este estudo objetivou a padronização de uma técnica para obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em gatos e a avaliação de sua ação sobre a cicatrização de feridas cutâneas produzidas experimentalmente nessa espécie. Ele desenvolveu-se em duas etapas distintas: na primeira foram comparados três protocolos manuais para produção de PRP em gatos. Utilizaram-se 15 animais adultos hígidos e domiciliados, divididos aleatoriamente em três grupos. Cinco amostras de 4,5ml de sangue foram colhidas da jugular de cada animal, por sistema a vácuo, sequencialmente, em tubos com citrato de sódio. As amostras de cada grupo foram processadas por meio de protocolos de dupla centrifugação: P1 (113g 10 minutos; 652g 5 minutos); P2 (400g 10 minutos; 800g 10 minutos); P3 (400g 10 minutos; 600g 10 minutos). As concentrações plaquetárias obtidas no PRP dos diferentes protocolos e a relação entre o PRP e contagem de plaquetas foram comparadas por teste-t. A viabilidade do modo de coleta a vácuo para a espécie e a facilidade de execução das técnicas também foram avaliadas. Na segunda etapa, foram utilizados dez gatos adultos hígidos, domiciliados. Em cada animal foram produzidos, cirurgicamente, quatro defeitos circulares, pareados, com diâmetro de 1 cm, na pele, nas laterais esquerda e direita da linha média dorsal do tronco. As lesões de um lado foram tratadas com PRP líquido, obtido do próprio animal, de acordo com o melhor protocolo definido na primeira etapa do experimento. Os defeitos do lado oposto, considerados controle, foram preenchidos com solução de NaCl 0,9% estéril. As feridas foram avaliadas por três observadores, a cada três dias, por 28 dias. Considerou-se a presença de crostas, dor, edema, exsudato, tecido de granulação e a coloração. Os resultados foram avaliados estatisticamente pelo teste de Mann-Whitney em ranks. A área de cada lesão foi analisada por morfometria a cada sete dias e os dados comparados pelo teste-t. Também, semanalmente, foram obtidos fragmentos de pele contendo tecido normal e cicatricial a partir das duas lesões (tratada e controle) mais craniais. Os fragmentos foram corados por hematoxilina-eosina (HE) e tricrômico de Masson, e avaliados qualitativamente quanto a presença de crosta, úlcera, acantose, fibroplasia, colagenização e neovascularização. Esses dados foram analisados pelo teste de Mann-Whitney em ranks. O sistema de coleta de sangue a vácuo mostrou-se satisfatório e simplificou o procedimento. Duas das técnicas (P2 e P3) mostraram-se factíveis para a produção do PRP, proporcionando concentrações superiores a 1x106 plaquetas.μl-1. O protocolo P3 mostrou-se estatisticamente superior na capacidade de incremento, e foi selecionado para uso nas feridas experimentais. Na segunda etapa, a técnica para coleta de sangue e o protocolo selecionado, mostraram-se satisfatórios. A utilização do PRP na forma líquida, depositado diretamente sob a lesão, tornou fácil sua utilização. Clinicamente, houve diferença estatisticamente significativa (p=0,025) e maior exsudação nas feridas tratadas no dia três. Na análise morfométrica, notou-se maior contração nas feridas tratadas com PRP, principalmente nos primeiros sete dias (p=<0,001). Na avaliação histopatológica semi-quantitativa não houve significância em nenhum dos parâmetros comparados. Logo, conclui-se que o método de coleta é eficiente, e podem-se considerar exequíveis as técnicas para obtenção do PRP em gatos, a partir dos protocolos P2 e P3. O protocolo P3 demonstra superior eficiência na capacidade de concentrar plaquetas, gerando um PRP de melhor qualidade. É possível a ativação do PRP líquido por meio da lesão tecidual. O aumento da exsudação sugere intensificação do processo inflamatório nas feridas tratadas. O uso terapêutico do PRP na forma líquida melhora a capacidade de contração em feridas produzidas experimentalmente em gatos, apesar da ausência de evidências histopatológicas pela avaliação adotada.