EFEITO DE Paullinia cupana (Mart.) NO ESTRESSE OXIDATIVO INDUZIDO PELO NITROPRUSSIATO DE SÓDIO EM CELÚLAS DE FIBROBLASTOS EMBRIONÁRIOS NIH-3T3

• Main Author: Bittencourt, Leonardo da Silva
• Other Authors: Cruz, Ivana Beatrice Mânica da
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Santa Maria 2011
• Subjects: Paullinia cupana; Óxido Nítrico; Neutralilzador de radicais livres; Radicais livres; Nitric Oxide; Free radical scavengers; Free radicals; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
• Online Access: http://repositorio.ufsm.br/handle/1/11181

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === The antioxidant effects of the hydro-alcoholic guaraná extracts (Paullinia cupana var. sorbilis Mart.) on nitric oxide (NO ) and other compounds generated from degradation of Sodium Nitroprusside (SNP) in embryonic fibroblast culture (NIH-3T3 cells) were evaluated. The guaraná bioactive compounds were initially determined by a high-performance liquid chromatography (HPLC): caffeine=12.240 mg/g, theobromine=6.733 mg/g and total catechins= 4.336 mg/g. To the experiments, initially the cells were grown in DMEM (Dulbecco s Modified Eagle Medium) medium and incubated in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 37°C until reach 90% confluence. Cell cultures were exposed to 10μM SNP during six hours since in this concentration the cells present >90% mortality. Guaraná diluted in water was added in the cultures in five concentrations (0.5, 1, 5, 10 and 20 mg/mL). MTT and Trypan blue viability, biochemical oxidative markers and genotoxicity (DNA Comet assay) analysis were performed. Additionally, the cell oxidative stress was evaluated by 2,7 dihydrodichlorofluorescein diacetate (DCFDA) fluorescence assay by confocal microscopy. Guaraná reverted the SNP toxicity mainly in lower concentrations (<5 mg) decreasing cell mortality, lipid peroxidation, DNA damage and cell oxidative stress and increasing the SOD levels. However, guarana was unable to reverse the inhibition of catalase probably triggered by the presence of cyanide which is also produced in the decomposition of SNP. The results suggest that guarana has effects on the modulation of excessive amounts of NO probably through its antioxidant properties. These results supported previous studies that suggest guarana have a protective effect against morbidity as obesity and metabolic syndrome that are related to metabolism. === Os efeitos antioxidantes do extrato hidro-alcoólico de guaraná (Paullinia cupana var. sorbilis) sobre o Óxido Nítrico (NO ) e outros compostos gerados a partir da decomposição do Nitroprussiato de Sódio (NPS) em cultura de fibroblastos embriônicos (NIH 3T3) foram avaliados. Os compostos bioativos do guaraná foram inicialmente determinados por cromatografia líquida de alta performance (HPLC): cafeína=12,240 mg/g, teobromina=6,733 mg/g e catequinas totais=4,336 mg/g. Para os experimentos as células foram inicialmente cultivadas em meio DMEM (Dulbecco s Modified Eagle Medium) e incubadas em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 a 37°C até chegar a uma confluência de 90%. As culturas de células foram expostas ao NPS na concentração de 10μM durante seis horas. Nesta concentração de NPS e tempo de exposição ocorre uma taxa de mortalidade celular >90%. O guaraná diluído em água foi adicionado em cinco diferentes concentrações (0,5, 1, 5, 10 e 20 mg/mL). Os ensaios de viabilidade MTT e azul de tripan, de marcadores bioquímicos de estresse oxidativo e genotoxicidade (ensaio cometa) foram realizados. Adicionalmente, o estresse oxidativo celular foi avaliado através do ensaio da fluorescência do diacetato de 2,7 diclorofluoresceína (DCFDA) via microscopia confocal. O guaraná reverteu à toxicidade induzida pelo NPS principalmente em concentrações mais baixas (<5mg/mL), diminuindo a: mortalidade celular, peroxidação lipídica, dano de DNA e produção de espécies reativas a aumentou os níveis da enzima Super Óxido Dismutase (SOD). Entretanto, o guaraná não conseguiu reverter a inibição da catalase provavelmente desencadeada pela presença de cianeto que também são produzidos na decomposição do NPS. Os resultados sugerem que o guaraná tem efeitos na modulação das quantidades excessivas de NO provavelmente através de suas propriedades antioxidantes. Estes resultados confirmaram estudos prévios que sugerem que o guaraná tem efeito protetor contra morbidades como obesidade e síndrome metabólica que são relacionadas ao metabolismo.