Produção in vitro de embriões bovinos com cisteamina

• Main Author: Silva, Daniela Scherer da
• Other Authors: Rubin, Mara Iolanda Batistella
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Santa Maria 2017
• Subjects: Antioxidantes; PIV; Bovinos; Cisteamina; Bos taurus indicus; Antioxidants; IVP; Bovine; Cysteamine; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
• Online Access: http://repositorio.ufsm.br/handle/1/10134

Advanced reproductive techniques use the 3 phase of in vitro production for bovine embryos, i.e. in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro culture (IVC) as support for a variety of studies. This study assessed the effect of cysteamine, a thiol component, on the embryonic development during maturation, fertilization and in vitro culture. Bos taurus indicus Cumulus-oocyte complexes (COC) obtained from cow ovaries collected at a slaughterhouse were randomly distributed in four groups: controlgroup (without cysteamine, n=488), cysteamine in maturation (n=487), cysteamine in fertilization (n=489) and cysteamine in the culture medium (n=493). All COC were matured for 24h in TCM-199+0,01IUrFSH/mL+0,05mgLH/mL+10% fetal calf serum (FCS). In the cysteamine-maturation group, the TCM-199 medium was supplemented with 150μM cysteamine. The COC were matured at 38.5ºC with 5% of CO2 in air and humid atmosphere. The IVF (D0=fertilization day) was performed for 18-22h in Talp-Fert medium with heparin and PHE under the same conditions as IVM. The medium of the cysteamine-fertilization group was supplemented with 150μM cysteamine. For sperm capacitation, the semen was thawed, selected by percoll gradient and insemination was done with 2x106 spermatozoa/mL. Presumed zygotes from all groups were cultured in SOF + 5% FCS. In the cysteamine culture group the SOF medium was supplemented with 150μM cysteamine. Culture was maintained at 5%CO2, 5%O2, 90%N2 and saturated humidity for 8 days. Cleavage rates were 86, 89, 88 and 90 respectively, for control, maturation, fertilization and culture groups. Percentage of blastocyst on D7 were 29, 31, 38 e 35 and blastocyst hatched on D9 were 21, 23, 27 and 29, respectively. This study showed that adding cysteamine to the fertilization or culture medium improve the blastocyst production. Commercial OPU/IVP programs maybe benefit from the use of cysteamine. === As biotécnicas reprodutivas atuais utilizam como suporte para outros estudos a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, conduzida em três etapas igualmente importantes: maturação in vitro (MIV), fecundação in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV). Nesta pesquisa avaliou-se o efeito da cisteamina, um componente thiol, nos meios de maturação, fecundação ou de cultivo sobre o desenvolvimento embrionário. Complexos cumulusoócitos (CCO=oócitos) coletados de ovários de vacas Bos taurus indicus provenientes de frigorífico foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: Grupo Controle (sem cisteamina, n=488), Cisteamina na maturação (n=487), Cisteamina na fecundação (n=489) e Cisteamina no cultivo (n=493). Os oócitos dos quatro grupos foram maturados por 24h em TCM-199 modificado acrescido de 0,01UI/mL rFSHh + 0,05mg/mL de LH e 10% de SFB. No grupo cisteamina-maturação, o meio TCM-199 foi suplementado com 150μM de cisteamina. Os oócitos foram maturados a 38,5ºC em estufa com 5%CO2 em ar e umidade saturada. A FIV (D0=dia da fecendação) foi realizada por 18-22 horas em meio Fert-Talp acrescido de heparina e PHE. Este meio utilizado no grupo cisteamina-fecundação foi adicionado de 150μM de cisteamina. Para capacitação, o sêmen foi descongelado e processado através do Gradiente de Percoll e a inseminação foi realizada com 2x106 espermatozóides/mL, nas mesmas condições atmosféricas da MIV. Os prováveis zigotos de todos grupos experimentais foram cultivados em meio SOF suplementado com 5% SFB. No grupo cisteamina-cultivo o meio SOF foi acrescido de 150μM de cisteamina. A atmosfera gasosa nos 8 dias de cultivo foi de 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 e umidade saturada. A clivagem foi de 86, 89, 88 e 90%, obtendo-se 29, 31, 38 e 35% de blastocistos em D7 e 21, 23, 27 e 29% de eclosão para os grupos controle, maturação, fecundação e cultivo, respectivamente. Em meio de fecundação (Fert-Talp) ou em meio de cultivo (SOFaaci) a cisteamina promove maior produção embrionária. O uso da cisteamina nos programas comerciais de OPU/PIV poderá contribuir para melhor eficiência da produção embrionária.