| Summary: | Advanced reproductive techniques use the 3 phase of in vitro production for bovine
embryos, i.e. in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro culture (IVC)
as support for a variety of studies. This study assessed the effect of cysteamine, a thiol
component, on the embryonic development during maturation, fertilization and in vitro
culture. Bos taurus indicus Cumulus-oocyte complexes (COC) obtained from cow
ovaries collected at a slaughterhouse were randomly distributed in four groups: controlgroup
(without cysteamine, n=488), cysteamine in maturation (n=487), cysteamine in
fertilization (n=489) and cysteamine in the culture medium (n=493). All COC were
matured for 24h in TCM-199+0,01IUrFSH/mL+0,05mgLH/mL+10% fetal calf serum
(FCS). In the cysteamine-maturation group, the TCM-199 medium was supplemented
with 150μM cysteamine. The COC were matured at 38.5ºC with 5% of CO2 in air and
humid atmosphere. The IVF (D0=fertilization day) was performed for 18-22h in Talp-Fert
medium with heparin and PHE under the same conditions as IVM. The medium of the
cysteamine-fertilization group was supplemented with 150μM cysteamine. For sperm
capacitation, the semen was thawed, selected by percoll gradient and insemination was
done with 2x106 spermatozoa/mL. Presumed zygotes from all groups were cultured in
SOF + 5% FCS. In the cysteamine culture group the SOF medium was supplemented
with 150μM cysteamine. Culture was maintained at 5%CO2, 5%O2, 90%N2 and saturated
humidity for 8 days. Cleavage rates were 86, 89, 88 and 90 respectively, for control,
maturation, fertilization and culture groups. Percentage of blastocyst on D7 were 29, 31,
38 e 35 and blastocyst hatched on D9 were 21, 23, 27 and 29, respectively. This study
showed that adding cysteamine to the fertilization or culture medium improve the
blastocyst production. Commercial OPU/IVP programs maybe benefit from the use of
cysteamine. === As biotécnicas reprodutivas atuais utilizam como suporte para outros estudos a produção
in vitro (PIV) de embriões bovinos, conduzida em três etapas igualmente importantes:
maturação in vitro (MIV), fecundação in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV). Nesta pesquisa
avaliou-se o efeito da cisteamina, um componente thiol, nos meios de maturação,
fecundação ou de cultivo sobre o desenvolvimento embrionário. Complexos cumulusoócitos
(CCO=oócitos) coletados de ovários de vacas Bos taurus indicus provenientes
de frigorífico foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: Grupo
Controle (sem cisteamina, n=488), Cisteamina na maturação (n=487), Cisteamina na
fecundação (n=489) e Cisteamina no cultivo (n=493). Os oócitos dos quatro grupos
foram maturados por 24h em TCM-199 modificado acrescido de 0,01UI/mL rFSHh +
0,05mg/mL de LH e 10% de SFB. No grupo cisteamina-maturação, o meio TCM-199 foi
suplementado com 150μM de cisteamina. Os oócitos foram maturados a 38,5ºC em
estufa com 5%CO2 em ar e umidade saturada. A FIV (D0=dia da fecendação) foi
realizada por 18-22 horas em meio Fert-Talp acrescido de heparina e PHE. Este meio
utilizado no grupo cisteamina-fecundação foi adicionado de 150μM de cisteamina. Para
capacitação, o sêmen foi descongelado e processado através do Gradiente de Percoll e
a inseminação foi realizada com 2x106 espermatozóides/mL, nas mesmas condições
atmosféricas da MIV. Os prováveis zigotos de todos grupos experimentais foram
cultivados em meio SOF suplementado com 5% SFB. No grupo cisteamina-cultivo o
meio SOF foi acrescido de 150μM de cisteamina. A atmosfera gasosa nos 8 dias de
cultivo foi de 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 e umidade saturada. A clivagem foi de
86, 89, 88 e 90%, obtendo-se 29, 31, 38 e 35% de blastocistos em D7 e 21, 23, 27 e
29% de eclosão para os grupos controle, maturação, fecundação e cultivo,
respectivamente. Em meio de fecundação (Fert-Talp) ou em meio de cultivo (SOFaaci) a
cisteamina promove maior produção embrionária. O uso da cisteamina nos programas
comerciais de OPU/PIV poderá contribuir para melhor eficiência da produção
embrionária.
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