Hiperamonemia ativa HIF-1α pela via NF-kB : um possível mecanismo de sarcopenia em cirrose

• Main Author: Silva, Rafaella Nascimento e
• Other Authors: Leal, Ângela Merice de Oliveira
• Language: English
• Published: Universidade Federal de São Carlos 2017
• Subjects: Hiperamonemia; Fator induzido por hipóxia 1α; Miostatina; Músculo esquelético; Factor nuclear kappa B; Hyperammonemia; Hypoxia inducible factor 1α; Nuclear factor-kappaB; Myostatin; Skeletal muscle; CIENCIAS BIOLOGICAS::FISIOLOGIA
• Online Access: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9050

Submitted by Ronildo Prado ([e-mail]) on 2017-08-22T17:21:37Z No. of bitstreams: 1 TeseRNS.pdf: 3515617 bytes, checksum: 251005e22df508ed87d98457bd4a5d3d (MD5) === Approved for entry into archive by Ronildo Prado ([e-mail]) on 2017-08-22T17:21:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRNS.pdf: 3515617 bytes, checksum: 251005e22df508ed87d98457bd4a5d3d (MD5) === Approved for entry into archive by Ronildo Prado ([e-mail]) on 2017-08-22T17:21:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRNS.pdf: 3515617 bytes, checksum: 251005e22df508ed87d98457bd4a5d3d (MD5) === Made available in DSpace on 2017-08-22T17:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseRNS.pdf: 3515617 bytes, checksum: 251005e22df508ed87d98457bd4a5d3d (MD5) Previous issue date: 2016-09-15 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) === Hyperammonemia impairs skeletal muscle protein synthesis and induces autophagy by upregulating myostatin via nuclear factor-kappaB (NF-kB). Skeletal muscle ammonia metabolism occurs via synthesis of glutamate and glutamine via critical TCA intermediate α-KG, that regulates increase expression of hypoxia inducible factor 1α (HIF-1α). Furthermore, there is a interaction between HIF-1α and NF-kB. Objective: This study evaluated the effects of hyperammonemia in NF-kB and HIF-1α cross-talking. Methods: To examine the effects of ammonium acetate intervention under HIF-1α signaling through NF-kB pathway it has generated a stable knockdown cell line for NFkB and the subunits α and β of the I kappa B kinase (IKK) complex (IKKα and IKKβ) evaluating the HIF-1α and myostatin activities. Results: The protein expression of HIF- 1α was significantly higher in C2C12 murine myotubes under ammonium acetate intervention compared to control. Once the deletion of NF-kB, IKKα and IKKβ occurs, the HIF-1α is not expressed, suggesting a cross-talking between them. The protein expression of myostatin was significantly higher in C2C12 IKKα deletion under ammonium acetate intervention compared to C2C12 random suggesting that myostatin is not IKKα dependent. Conclusion: We conclude that hyperammonemia is a normoxemic activator of HIF-1α through NF-kB pathway that results in sarcopenia via up-regulation of myostatin expression. === Um dos grandes mediadores de sarcopenia em cirrose é a hiperamonemia. Esta anormalidade metabólica é frequente em doenças hepáticas promovendo conversão danificada de amônia em uréia prejudicando a síntese protéica e induzindo autofagia do músculo esquelético pela up-regulação de miostatina via fator nuclear kappa B (NFkB). O metabolismo de amônia no músculo esquelético ocorre via síntese de glutamato e glutamina através do intermediário metabólico α-cetoglutarato do ciclo de Krebs, que regula o Fator Induzido por Hipóxia (HIF-1α). Além disso, existe um interação entre os dois fatores de transcrição HIF-1α and NF-kB. Objetivo: Este estudo avalia os efeitos da hiperamonemia no cross-talking entre NF-kB and HIF-1α. Métodos: Para examinar os efeitos do aumento da concentração de amônia na expressão de HIF-1α através da via NF-kB foi realizado um knockdown estável de NF-kB, e as subunidades IKKα e IKKβ do complexo I kappa B quinase (IKK) em células C2C12 avaliando as atividades de HIF- 1α e miostatina. Resultados: A expressão protéica de HIF-1α foi significativamente alta em células C2C12 sob tratamento com acetato de amônia comparado com controle. Uma vez que ocorre o silenciamento de NF-kB, IKKα and IKKβ em células C2C12, não é observada a expressão protéica de HIF-1α, sugerindo um cross-talking entre eles. A expressão protéica de miostatina foi significativamente alta em células C2C12 silenciadas para IKKα sob tratamento com acetato de amônia comparado com células C2C12 random (controle), sugerindo que miostatina não é dependente da quinase IKKα. Conclusão: Foi concluído que hiperamonemia é um ativador normóxico de HIF-1α através da via de sinalização NF-kB resultando em sarcopenia via up-regulação de miostatina.