Caracterização estrutural e de expressão do gene exuperantia (exu) em Anastrepha fraterculus (Diptera, Tephritidae) e evidências de seleção positiva em Cyclorrhapha

• Main Author: Oliveira, Janaína Lima de
• Other Authors: Brito, Reinaldo Alves de
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de São Carlos 2016
• Subjects: Anastrepha; Exuperantia; Evolução molecular; Co-optação; Bicoid; Alternative splicing; Positive selection; Co-option; CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
• Online Access: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/8068

Submitted by Izabel Franco ([e-mail]) on 2016-10-10T13:11:28Z No. of bitstreams: 1 DissJLO.pdf: 1924288 bytes, checksum: 2b2ce6a9b82a3dfb41ddb5f343fde1b7 (MD5) === Approved for entry into archive by Marina Freitas ([e-mail]) on 2016-10-20T19:39:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissJLO.pdf: 1924288 bytes, checksum: 2b2ce6a9b82a3dfb41ddb5f343fde1b7 (MD5) === Approved for entry into archive by Marina Freitas ([e-mail]) on 2016-10-20T19:39:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissJLO.pdf: 1924288 bytes, checksum: 2b2ce6a9b82a3dfb41ddb5f343fde1b7 (MD5) === Made available in DSpace on 2016-10-20T19:39:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissJLO.pdf: 1924288 bytes, checksum: 2b2ce6a9b82a3dfb41ddb5f343fde1b7 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) === The genus Anastrepha (Tephritidae) has several species of great economic importance due to their impact in fruticulture. We are particularly interested in the evolutionary history of Anastrepha fraterculus, the most relevant species in the closely related group of species fraterculus, which has undergone recent divergence and holds the majority of species of economic importance in the genus. To better understand the differentiation process and identification in the group, we need to find molecular and morphological markers that are involved with the differences between species. Reproductive genes have, in general, been very informative in this regard due to their rapid evolutionary rates, although few of them have been studied and characterized in this species so far. Therefore, the present study focuses on the exuperantia gene (exu), which participates in both oogenesis (localization of bicoid and oskar mRNAs) and spermatogenesis, since exu embryos from mutant mothers are unviable and males are sterile. Thus, the first step was to use Next generation sequencing strategies (RNA-seq) to structurally characterize and define expression patterns of this gene between sexes in the cephalic and reproductive tissues of A. fraterculus. A. fraterculus has similar structural and expression patterns to Drosophila melanogaster in reproductive tissues, in which the transcripts differ between sexes for the 5’ and 3’ untranslated regions (UTRs). We describe for the first time the expression of exu in cephalic tissues, involving a new isoform that is common to both sexes. All these alternative spliced transcripts share a common coding region, resulting in the same protein. We used the exu coding region, along with sequences from several Diptera to investigate the molecular evolution of exu in Cyclorrhapha. This group has experienced an enormous adaptive radiation, associated with molecular and morphological changes, and by comparing the dN/dS ratio between Cyclorrhapha and other Diptera we found that exu was subjected to positive selection in Cyclorrhapha for at least two sites in the coding region. One of the sites is present in the RNA exonuclease-like domain of exu. The second site is located in a not characterized region that is conserved and under purifying selection in Diptera, suggesting that it may be an important region of the protein. The adaptive changes found in exu may reflect an evolutionary gain that allowed its co-option for a new function the gene performs in Cyclorrhapha: the localization of bicoid in the anterior region of the oocyte, since bcd is a gene exclusive of Cyclorrhapha. === O gênero Anastrepha (Tephritidae) é de grande importância econômica devido ao seu impacto na fruticultura nacional. Estudamos aqui a história evolutiva de Anastrepha fraterculus, a espécie mais relevante do grupo fraterculus, o qual sofreu divergência recente e contém a maioria das espécies de importância econômica do gênero. Para entender melhor o processo de especiação nesse grupo, e auxiliar no processo de identificação taxonômica, precisamos estabelecer marcadores morfológicos e moleculares envolvidos com as diferenças entre as espécies. Genes envolvidos com a reprodução têm se mostrado bastante informativos para estes propósitos, devido às rápidas taxas evolutivas que apresentam, embora poucos tenham sido estudados e caracterizados nessas espécies até o momento. Nesse sentido, esse trabalho tem como foco o gene exuperantia (exu), que participa tanto da ovogênese (localização dos mRNAs bicoid e oskar) quanto da espermatogênese, uma vez que embriões formados a partir de fêmeas mutantes exu são inviáveis e machos mutantes exu são estéreis. Assim, o primeiro passo foi caracterizar estruturalmente e definir padrões de expressão desse gene entre os sexos nos tecidos cefálicos e reprodutivos em A. fraterculus. Utilizando sequenciamento de próxima geração (RNA-seq), identificamos um padrão estrutural e de expressão semelhante àquele de Drosophila melanogaster em tecidos reprodutivos: os transcritos diferem nas regiões não traduzidas (UTRs) 5’ e 3’ entre os sexos. Pela primeira vez identificamos a expressão de exu em tecidos cefálicos, envolvendo uma nova isoforma que é igual nos dois sexos. Em todos os casos, as regiões codificadoras são iguais, resultando na sequência proteica. Utilizamos essa região codificadora de exu junto com sequências de outras espécies de Diptera para investigar a evolução molecular de exu em Cyclorrhapha, que sofreu uma grande radiação adaptativa associada com alterações morfológicas e moleculares. Comparando a relação dN/dS entre Cyclorrhapha e outros Diptera, encontramos dois sítios sob seleção positiva em Cyclorrhapha, um deles presente no domínio semelhante à RNA exonuclease de exu. O segundo está presente em uma região não caracterizada para domínios proteicos, mas que é bem conservada e está sob seleção purificadora em Diptera, sugerindo ser uma região importante da proteína. As mudanças adaptativas encontradas em exu podem refletir um ganho evolutivo que permitiu sua co-optação para uma nova função em Cyclorrhapha: a de localização de bicoid na região anterior do ovócito, visto que bcd é um gene exclusivo de Cyclorrhapha.