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Previous issue date: 2016-04-15 === Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) === Endothelial dysfunction has been considered a marker for the presence of
cardiovascular disease. It is characterized by decreased release of vasodilatory
factors and increased of vasoconstrictors factors. Nitric oxide (NO) is the main
endogenous vasodilator molecule that regulates the vascular tone and homeostasis.
Decrease in the bioavailability of NO can be caused by a variaty of factors, including
the increase in the production of superoxide radical O2
•-. The production of O2
•- can
be stimulated by angiotensin II, by the enzyme complex of the NADPH oxidase
activation. Thus, the objective of this work was to study the effects induced by
ruthenium complex cis-[Ru(H-dcbpy-)2(Cl)(NO2
-)] (DCBPY) and sodium nitroprusside
(SNP) in endothelial dysfunction model, as well as perform the pharmacological
characterization of the dependent effects removal of O2
•- and release of nitric oxide
(NO) induced by these drugs. Normotensive (2K) and hypertensive (2K-1C) wistar
rats were used. Aortic rings with intact endothelium were placed in a myograph and
incubated with DCBPY: 0.1; 1.0 ou 10 μM ou com SNP: 0.1; 1.0 ou 10 nM during 30
minutes. Curves concentration-effect of acetylcholine (ACh) were built where it was
possible to analyze all concentrations DCBPY and NPS improved relaxation induced
by ACh. NO was measured intracellular (for DAF-2DA probe) in HUVEC treated with
0.1 μM of DCBPY, 0.1 nM a SNP and 0.1 μM DETA-NO. It was not detected NO
release of the compounds DCBPY [0.1 μM] and SNP [0.1 nM]. It also evaluated the
release of NO compound DCBPY using an electrode selective for NO. The
compound DCBPY spontaneously release NO in solution form concentrationdependent,
starting from 10 μM concentration. DCBPY released more NO in the
presence of cells. This could be due to the reduction of the compound by reducing
cell. Intracellular detection of superoxide radical (O2
•-) was obtained by using the
fluorescent probe (DHE). Our results show that treatment of cells with DCBPY [0.1
μM] and SNP [0.1 nM] decreased the fluorescence intensity cells stimulated with
angiotensin II. Thus, it is suggested that DCBPY and SNP at a concentration which
does not release NO, inside the cells, they are capable of attenuating endothelial
dysfunction by inactivating superoxide. === A disfunção endotelial tem sido considerada um marcador para a presença de
doenças cardiovasculares. É caracterizada pela diminuição da liberação de fatores
vasodilatadores e/ou aumento da liberação de fatores vasoconstritores. O óxido
nítrico (NO) é a principal molécula vasodilatadora endógena que regula o tônus e a
homeostase vascular. A diminuição na biodisponibilidade do NO pode ser causada
por diversos fatores, incluindo o aumento na produção do radical superóxido O2
•-. A
produção do O2
•- pode ser estimulada pela angiotensina II, pela ativação do
complexo enzimático NADPH oxidase. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi
estudar os efeitos induzidos pelo complexo de rutênio cis-[Ru(H-dcbpy-)2(Cl)(NO2
-)]
(DCBPY) e Nitroprussiato de Sódio (NPS) em modelo de disunção endotelial, bem
como realizar a caracterização farmacológica dos efeitos dependentes da remoção
do O2
•- e liberação do óxido nítrico (NO) induzidos por estas drogas. Foram utilizados
ratos Wistar machos normotensos (2R) e hipertensos (2R-1C). Anéis de aortas com
endotélio intacto foram colocados em um miógrafo e incubados com DCBPY: 0,1;
1,0 ou 10 μM ou com NPS: 0,1; 1,0 ou 10 nM durante 30 minutos. Curvas
concentração-efeito à acetilcolina (ACh) foram construidas onde foi possível analisar
que todas as concentrações de DCBPY e NPS melhoraram o relaxamento induzido
pela ACh. NO intracelular foi medido (por sonda DAF-2DA) em HUVEC tratadas
com 0,1 μM de DCBPY, 0,1 nM de NPS ou 0,1 μM de DETA / NO. Não foi detectada
liberação de NO dos compostos DCBPY [0,1 μM] e NPS [0,1 nM]. Também foi
avaliada a liberação de NO do composto DCBPY utilizando eletrodo seletivo para
NO. O composto DCBPY libera NO espontaneamente em solução de forma
concentração dependente a partir da concentração 10 μM. Na presença das células,
houve um aumento na liberação de NO na concentração 10 μM do composto
DCBPY de 1,69 vezes em comparação com a detecção sem a presença de células.
Isto pode ter ocorrido devido à redução do composto por redutores celulares. A
detecção intracelular do radical superóxido (O2
•-) foi obtida através da utilização da
sonda fluorescente DHE. Os nossos resultados mostram que o tratamento de
células com DCBPY [0,1 μM] e de NPS [0,1 nM] diminuiu a intensidade de
fluorescência a DHE em células estimuladas com angiotensina II. Assim, sugere-se
que DCBPY e NPS, em uma concentração que não libera NO no interior das células,
são capazes de atenuar a disfunção endotelial por inativar o radical superóxido.
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