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Previous issue date: 2016-02-19 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) === Breast cancer is the most common type of cancer among women and results in 70% of cases of estrogen receptor alpha (ERα)
overexpression, a tumor biomarker. In the present study we developed a
sensitive and low cost disposable electrochemical immunosensor, coupled with a
microfluidic system, as an alternative to determine ERα, since there are no
reports on the determination of this compound in the literature using this
method. The immunosensor was developed by the screen printing method,
comprising a reference electrode, a counter electrode and an array of eight
working electrodes, all disposable. The working electrodes were modified by
layer-by-layer with poly(diallyldimethylammonium chloride) (PDDA) and gold nanoparticles decorated with glutathione (AuNP-GSH), in order to support, by covalent bond, a double-stranded DNA containing an estrogen response element
(dsDNA-ERE). Also, we use magnetic particles containing thousands of antibodies and enzymes, wherein the enzymes are responsible for indirect response from the immunosensor and antibodies are used to capture the analyte in the sample. Once that the analyte is captured, it interacts with the dsDNA-ERE immobilized on the surface of the working electrode. In the linear range
16.6 to 513.3 fg mL-1 were obtained detection limit of 10.0 fg mL-1, quantification limit of 16.89 fg mL-1 and a sensitivity of 7.7 nA mL fg [ ERα]-1. Finally, it was possible to test the immunosensor front of a real sample lysate
cells MCF-7, which showed that the device is a promising choice for use in the treatment and possible early diagnosis of breast cancer. === O câncer de mama é o tipo mais
comum de câncer entre as mulheres e resulta, em 70% dos casos, na
superexpressão do biomarcador tumoral receptor de estrógeno alfa (ERα). No
presente trabalho, foi desenvolvido um imunossensor eletroquímico descartável,
sensível e de baixo custo, acoplado a um sistema microfluídico, como uma
alternativa para se determinar ERα, uma vez que, não há relatos sobre a
determinação desse composto usando esse método na literatura. O imunossensor
foi desenvolvido pelo método de serigrafia, compondo de um eletrodo de
referência, um contra-eletrodo e um arranjo de oito eletrodos de trabalho, todos
descartáveis. Os eletrodos de trabalho foram modificados por layer-by-layer
com cloreto de poli(dialildimetilamônio) (PDDA) e nanopartículas de ouro
decoradas com glutationa (AuNP-GSH), a fim de sustentar, por ligação
covalente, uma dupla fita de DNA contendo um elemento de resposta de
estrógeno (dsDNA-ERE). Ainda, utilizam-se partículas magnéticas contendo
milhares de enzimas e anticorpos, no qual as enzimas foram responsáveis pela
resposta indireta do imunossensor e os anticorpos capturaram o analito na
amostra. Uma vez capturado o analito, estes interagiram com o dsDNA-ERE
imobilizado na superfície dos eletrodos de trabalho. Em intervalo linear de 16,6
a 513,3 fg mL-1 foram obtidos limite de detecção de 10,0 fg mL-1, limite de
quantificação de 16,89 fg mL-1 e sensibilidade de 7,7 nA mL fg [ERα] -1. Por
fim, foi possível testar o imunossensor frente a uma amostra real de lisado de
células MCF-7, o que evidenciou que o dispositivo é uma escolha promissora
para uso no tratamento e possível diagnóstico precoce do câncer de mama.
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