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Previous issue date: 2005-09-19 === Universidade Federal de Sao Carlos === In the last 10 years the insect cell Drosophila melanogaster Schneider S2 has been increasingly used for studies of proteins recombinants. However, there is a lack of studies that involved parameters related to the use of the insect cell Drosophila melanogaster in bioprocess. The aim of this work was to study the factors physiologies important in the cultures of the insect cells Drosophila melanogaster S2 (S2) and recombinant S2 (rS2), through cultures in Schott flask, serum free medium at 28°C. There were performed experiments with the purpose of monitoring the viability cellular of insect cells by the methods of exclusion of Trypan blue and of fluorescent dyes. Both methods used in the experiments to monitor the viability of the cultures of the cells S2 and rS2 were shown reliable for the identification of the percentage of viable cells. The studies revealed that growth of S2 and rS2 cells was not limited by the total consumption of amino acids and glucose. In the experiments utilizing the rS2 cells to verify the influence of the age of the inoculum and concentration of the inoculum, it was verified that both parameters did not have influence in the growth specific rate. Experiments done in Schott flask of 250 mL with a working of 50 mL, in which were monitored the concentration of dissolved oxygen (DO) in the broths of cultivation of the cells S2 and rS2. The results demonstrated that the cultivation reaches the stationary phase with very low level of dissolved oxygen, whit DO being a limiting factor of the growth of the cells. The specific oxygen consumption rate (QO2) demonstrates an accentuated decrease in the exponential phase of growth, except for stationary phase. The excess of oxygen in the initial phase of the cultivation was harmful to the growth of the cells. However, in the experiments done in Schott flask 100 mL with a working volume of 20 mL, QO2 of the cells rS2, revealed 10 to 15 times smaller than these performed in the Schott flask of 250 mL. The experiments done in Schott flask of 100 mL with different agitations demonstrated that for low agitation the transfer of oxygen should be a limiting factor in the cellular growth. The cellular viability for all of the experiments performed in different agitations stayed between 95 and 99% of viable cells indicating that the cells were in good physiologic state. === Nos últimos 10 anos a célula de inseto Drosophila melanogaster Schneider S2 tem se destacado nos estudos de proteínas recombinantes. Entretanto, encontra-se na literatura pouco estudo dos parâmetros relacionado ao uso da célula de inseto Drosophila melanogaster em bioprocessos. O presente trabalho foram avaliados fatores fisiológicos importantes no do cultivo das células de inseto Drosophila melanogaster S2 (S2) e recombinante S2 (rS2) através de cultivos em frasco Schott e meio livre de soro a 28°C. Realizaram-se experimentos nos quais foi acompanhada a viabilidade celular das células de insetos pelos métodos de exclusão de corante azul de Tripan e de corantes fluorescentes. Ambos os métodos utilizados nos experimentos para acompanhar a viabilidade do cultivo das células S2 e rS2 se mostraram confiáveis para identificação da porcentagem de células viáveis. Os estudos demonstraram que o crescimento das células S2 e rS2 não foram limitados pelo consumo total de aminoácidos e glicose. Nos experimentos utilizando as células rS2 para verificar a influência da idade e concentração do inóculo, verificou-se que ambos os parâmetros não tem influência na velocidade específica de crescimento máxima. Foram realizados experimentos em frasco Schott de 250 mL com volume de trabalho de 50 mL, nos quais foram monitoradas as concentrações de oxigênio dissolvido (OD) nos caldos de cultivo das células S2 e rS2. Os resultados demonstraram que o cultivo atingiu a fase estacionária com nível muito baixo de oxigênio dissolvido. Sendo este um fator limitante do crescimento das células. A velocidade específica de respiração celular (QO2) demonstrou um decréscimo acentuado na fase exponencial de crescimento exceto para fase estacionária. O excesso de oxigênio na fase inicial do cultivo foi prejudicial para o crescimento das células. Entretanto, nos experimentos realizados em frasco Schott de 100 mL com volume de trabalho de 20 mL, QO2 das células rS2 apresentou-se 10 a 15 vezes menor que realizados no frasco Schott de 250 mL. Os experimentos realizados em frasco Schott de 100mL com diferentes agitações demonstraram que para baixa agitação, a transferência de oxigênio deve ser um fator limitante no crescimento celular. A viabilidade celular para todos os experimentos realizados em diferentes agitações se manteve entre 95 e 99% de células viáveis, indicando que as células estavam em bom estado fisiológico.
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