Caracterização da atividade antioxidante e inibidora da tirosinase de substâncias extraídas da Araucaria angustifolia (Bertol.) Kuntze e encapsulação em nanopartículas biodegradáveis

• Main Author: Seccon, Andrea
• Other Authors: Universidade Federal de Santa Catarina
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: 2012
• Subjects: Farmácia; Pinheiro-do-parana; Araucariacea; Antioxidantes; Nanopartículas
• Online Access: http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/94183

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia === Made available in DSpace on 2012-10-25T07:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279958.pdf: 2987524 bytes, checksum: 2b49100a66b0a7f1bf69a6cc0a6ef6c2 (MD5) === Este estudo teve como objetivo caracterizar a atividade antioxidante e inibidora da tirosinase de substâncias extraídas da Araucaria angustifo-lia (SEAA) e encapsular a substância mais ativa em nanopartículas. As SEAA, denominadas neste estudo pelas siglas EHB (extrato hidroalcoó-lico bruto), FA (fração acetato), AB (ácido benzóico), PHA (ácido para-hidroxibenzóico), AP (ácido protocatéquico), EAB (epiafzelechina este-rificada pelo ácido para-hidroxibenzóico) e EAP (epiafzelechina esteri-ficada pelo ácido protocatéquico) foram primeiramente avaliadas quanto ao seu potencial antioxidante pelos métodos de DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) e voltametria cíclica. Posteriormente as mesmas subs-tâncias foram testadas quanto à capacidade de proteção contra a lipope-roxidação induzida pela radiação ultravioleta (UV) e pelos radicais hi-droxila (oOH) e ascorbila (oAsc) tendo como alvo lipossomas de fosfati-dilcolina de soja. A atividade inibidora da tirosinase foi primeiramente avaliada frente à enzima isolada e posteriormente foram conduzidos testes em linhagem celular de melanoma murino B16F10. Os resultados obtidos foram calculados pela média ± desvio padrão em programa esta-tístico Graphpad Prisma 4. Todas as substâncias apresentaram atividade antioxidante de maneira dependente de concentração, porém EAP foi mais efetivo tanto nos ensaios de DPPH (IC50= 0,7 ± 0,05 µM) como em termos de potencial de oxidação (283 mV). Nos ensaios de lipoperoxi-dação EAP apresentou IC50= 21 ± 2 µM e 35 ± 5 µM para radiação UV e oAsc, respectivamente e FA obteve IC50 = 25 ± 2,5 µg.ml-1; 17 ± 1 µg.ml-1 e 22 ± 2 µg.ml-1, para UV, oAsc e oOH, respectivamente. Nos ensaios de inibição da tirosinase isolada foram obtidos K0,5= 8 ± 3 µM; 9 ± 1 µM e 32 ± 2,5 µM para EAB, AB e PHA respectivamente e um K0,5 = 21 ± 2µg.ml-1 e 30 ± 4 µg.ml-1 para FA e EHB. A inibição da tirosinase celular foi avaliada para EAB (IC50 = 1 µM) frente à hidro-quinona usada como controle positivo (IC50 = 0,7 µM). Os resultados obtidos foram promissores e FA foi selecionada para ser encapsulada em nanopartículas lipídicas sólidas para a preparação de uma formula-ção para uso cosmético. Algumas formulações foram testadas e a esco-lhida obteve um percentual de encapsulação de 83%, calculado a partir de uma curva de calibração obtida dos espectros de absorção desta fra-ção em espectrofotômetro UV/VIS === The aim of this study was to characterize the antioxidant and tyrosinase inhibitory activities of the substances extracted from the dead-bark of Araucaria angustifolia (SEAA) and encapsulate the most active substance in nanoparticles. The SEAA, named as EHB (crude extract), FA (acetate fraction), AB (benzoic acid), PHA (para-hydroxybenzoic acids), AP (protocatechuic acid), EAB (epiafzelechina esterified by para-hydroxybenzoic acids) and (EAP epiafzelechina esterified by protocatechuic acid) were first assessed for their antioxidant potential by the method of DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) and the cyclic voltammetry (VC) was carried out to obtain the redox potentials of the isolated compounds. Subsequently the same substances were tested for their ability to protect the lipid peroxidation induced by ultraviolet radiation (UV), and hydroxyl (oOH) and ascorbyl (oAsc) radicals targeting soy phosphatidylcholine liposomes. The tyrosinase inhibitory activity was first evaluated toward the isolated enzyme and further tests were performed on cell lines of murine melanoma B16F10. The results were showed as mean ± standard deviation obtained with the Graphpad Prism4 statistical software. All substances presented antioxidant activity in a concentration-dependent manner, and EAP showed the best antioxidant potential. For DPPH assay the IC50 = 0.7 ± 0.05 µM and the oxidation potential of 283 mV. Evaluating the protection toward the lipid peroxidation EAP presented IC50 = 21 ± 2 µM and 35 ± 5 µM for UV and oAsc, respectively and FA presented IC50 = 25 ± 2.5 µg.ml-1, 17 ± 1 µg.ml-1 and 22 ± 2 µg.ml-1 for UV, oAsc and oOH, respectively. The K0,5 obtained following the effect of the plant material on tyrosinase activity were 8 ± 3 µM; 9 ± 1 µM and 32 ± 2.5 µM for EAB, AB and PHA, respectively, and 21 ± 2 ?g.ml-1 and 30 ± 4 ?g.ml-1 to FA and EHB, respectively. The inhibition of the cell tyrosinase was evaluated for EAB (IC50 = 1 µM) and is comparable to the one obtained with hydroquinone, used as positive control (IC50 = 0.7 µM). FA was then selected to be encapsulated in lipid nanoparticles for the preparation of a formulation for cosmetic use. Some formulations have been evaluated and the chosen one allowed an encapsulation percentage of 83 %, calculated from a calibration curve obtained from the absorption spectrum of this fraction in a spectrophotometer UV / VIS