| Summary: | Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017 === Made available in DSpace on 2017-09-19T04:12:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
347028.pdf: 2777968 bytes, checksum: e2e99a611a7b5f21296a003c94110659 (MD5)
Previous issue date: 2017 === O melanoma é o mais grave tipo de câncer de pele pela possibilidade de metástase e desde 1975, a dacarbazina continua a ser o tratamento padrão, mesmo apresentando muitas reações adversas. O número de candidatos a agentes antitumorais vem crescendo a cada ano, porém a falta de modelos in vitro representativos de um microambiente tumoral não acompanha este crescimento. A cultura tridimensional (3D) se mostra um dos melhores modelos in vitro para mimetizar o microambiente tumoral. Neste trabalho, utilizando a estratégia de formação de esferoide, desenvolveu-se um modelo celular 3D de melanoma murino isolado ou associado a macrófagos e fibroblastos. Para o melanoma, um modelo assim ainda não foi descrito na literatura. Dentre as tentativas, o modelo foi padronizado utilizando gel de agarose 2% como base e uma densidade celular de 1,2×104/poço para a formação dos esferoides. Os esferoides formados apresentaram tamanho médio de 300 µm compatível com a literatura. Além disso, o heteroesferoide composto pelas três linhagens celulares (melanoma, macrófagos e fibroblastos) mostrou-se mais rígido e estável aparentemente, em comparação com as outras condições testadas, características estas provavelmente provenientes da alta produção de matriz extracelular. Os esferoides supostamente demonstraram a formação de duas zonas: uma periférica de células viáveis e outra interna de células necróticas, que foram confirmadas pela contagem de células, a qual diminuiu no sétimo dia em relação ao quarto dia de cultivo 3D e pela presença de grandes espaços vazios no interior dos esferoides, observados pela microscopia. O perfil inflamatório dos macrófagos presentes nos esferoides foi induzido usando lipolissacarídeo (LPS) para polarização M1 e dexametasona (DEX) para polarização M2. Após caracterização dos esferoides, estes foram incubados com o sal de isotiourônio MF03 e a dacarbazina. Os resultados revelaram que o sal de isotiourônio MF03 mostrou-se mais citotóxico que a dacarbazina no modelo 3D de melanoma. Adicionalmente, observou-se diferenças importantes em termos de citotoxicidade das moléculas, comparando-se o modelo bidimensional (2D) com o 3D. Diante dos resultados, conclui-se que foi desenvolvido um modelo 3D de melanoma adequado para a triagem de possíveis agentes antitumorais, sendo que o sal de isotiourônio MF03 mostrou-se promissor para o tratamento antitumoral de melanoma.<br> === Abstract: Melanomas is the most severe type of skin cancer, and since 1975, dacarbazine remains the standard treatment for most patients, even presenting many adverse reactions. The number of candidates to antitumor agents is increasing every year, although the lack of in vitro models to represent the tumor microenvironment disrupts the process. Three-dimensional (3D) culture is one the best in vitro models to mimic the tumor microenvironment. In this work, using spheroid strategies, a 3D murine melanoma cellular model isolated or associated with macrophages and fibroblasts was developed. Melanoma model has not been described previously. Among the attempts the model was standardized using agarose gel 2 % and a cell density of 1,2×104/well to spheroid formation. Spheroids size was around 300 µm, as described in the literature. In addition, heterospheroids composed of three cell lines (melanoma, macrophages and fibroblasts) showed more rigid and stable apparently when compared with other tried conditions, probably due to high extracellular matrix production. Spheroids supposedly showed two different regions: a peripheral zone containing viable cells and an internal zone containing necrotic cells which was demonstrated by the decrease in the number of cells on the seventh day when compared with the day four, and by presence of large empty spaces inside the spheroids, visualized by microscopy. The inflammatory profile associated with the macrophages-containing spheroids was induced using lipopolysaccharide (LPS) to M1 polarization and dexamethasone to M2 polarization. Following the characterization, spheroids were incubated with MF03 isothiouronium salt and dacarbazine. The results showed that MF03 was most cytotoxic than dacarbazine using the 3D melanoma model. Additionally, it was observed significant cytotoxic differences between bidimensional (2D) and 3D models. In conclusion, we developed a 3D melanoma model to improve the screening of new antitumor agents as well as the promising application of MF03 as a new anti-melanoma.
|
|---|
