Investigação fitoquímica e biológica da espécie

• Main Author: Horst, Heros
• Other Authors: Universidade Federal de Santa Catarina
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Florianópolis 2013
• Subjects: Quimica; Produtos naturais; Alcaloides indolicos
• Online Access: http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/100572

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. === Made available in DSpace on 2013-06-25T20:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 308812.pdf: 6957308 bytes, checksum: 9609b6b935603911a49df28bf5cea55b (MD5) === A investigação fitoquímica biomonitorada das cascas da espécie Esenbeckia leiocarpa confirmou a presença de alcaloides de núcleo indólico como principais metabólitos secundários da espécie. O particionamento do extrato bruto por extração ácido-base originou uma fração rica em alcaloides (FRA) e por outro lado, o particionamento com solventes de diferentes polaridades originou as frações solúveis em hexano (Fr Hex), acetato de etila (FrAcOEt) e a fração aquosa (FrAq). A avaliação do extrato e frações da espécie na atividade anti-inflamatória, no modelo de pleurisia induzida em camundongos, demonstrou que o extrato bruto e frações inibiram a migração de leucócitos, neutrófilos e células mononucleares, assim como na exsudação. O fracionamento cromatográfico da fração rica em alcaloides (FRA) levou ao isolamento e caracterização de alcaloides de núcleo indólico, dihidrocorinanteol [1] N-óxido isositsiriquina [2] e do dihidrocorinanteol acetilado [3] além destes, obeteve-se dois fitoesteróis, ß-sitosterol glicosilado e estigmasterol. A purificação em CLAE semipreparativa dos compostos isolados da fração aquosa levou ao isolamento de dois glucoalcaloide da classe ß-carbolínico, um inédito [4] e a desoxicordifolina [5]. A análise do extrato bruto e frações através da eletroforese capilar demonstrou a abundante presença do alcaloide dihidrocorinanteol no extrato bruto e frações, exceto na fração hexânica. Todos os compostos isolados a partir das cascas da epécie E. leiocarpa foram caracterizados com auxílio de espectroscopia de IV, espectrometria de massas ESI-MS e RMN ¹H, ¹³C e mapas de correlação bidimensionais. O extrato bruto, frações e os alcaloides presentes na espécie, foram avaliados através de ensaios antioxidantes e de inibição da acetilcolinesterase. Os resultados obtidos nos testes antioxidantes para extrato e frações apresentaram baixos teores totais de flavonóides e fenólicos, demonstrando que na constituição química da espécie não consta quantidades significativas destes compostos. A avaliação da capacidade sequestradora de radical livre DPPH, como esperado não foi significativa, o que confirma os resultados anteriores, no entanto o teste para poder redutor foi considerado interessante, sugerindo que os alcaloides podem agir como redutores, por mecanismos distintos aos dos fenólicos. Para o ensaio de inibição da enzima acetilcolinesterase, percebeu-se um efeito antagônico dos constituintes presentes no extrato bruto e frações, já que os resultados foram menores que o controle, no entanto para os alcaloides isolados da fração FRA: acetildihidrocorinanteol [3], N-óxido isositsiriquina [2a-b] e a da fração FrAq desoxicordifolina [5] os resultados foram excelentes, inibindo a enzima em até 100% numa concentração de 0.1 µg/mL, o que representa 500 vezes mais potente que o controle, galantamina, 80% de inibição a 50 µg/mL. === The phytochemical research of bark of Esenbeckia leiocarpa guided by biological assays showed the presence of indole alkaloids as the main secondary metabolites. The acid-base partitioning of crude hydroalcoholic extract gave a fraction rich in alkaloids (FRA), on the other hand, the crude hydroalcoholic extract partitioned with n-hexane, and ethyl acetate yielded the n-hexane (Fr Hex), ethyl acetate (FrAcOEt) and aqueous fraction (FrAq) fractions. The anti-inflammatory activity of the crude hydroalcoholic extract and fractions on the model of pleurisy induced in mice showed that the crude hydroalcoholic extract and fractions inhibited the migration of leukocytes, neutrophils and mononuclear cells, as well as the process of exudation. For myeloperoxidase (MPO), adenosine deaminase (ADA) and concentrations of cytokines (TNF-a and IL-ß) pro-inflammatory results were similar to the control, indomethacin and dexamethasone. The fraction rich in alkaloids (FRA) was subjected to silica gel chromatographic column led to the isolation and characterization of indole alkaloids, dihidrocorinanteol [1], N-oxide isositsiriquina [2] and dihidrocorinanteol acetylated [3], besides, we obtained two phytosterols, ß- sitosterol and stigmasterol glycoside. The semipreparative HPLC purification of compounds isolated from the aqueous fraction led to the isolation of two ß- carboline glucoalcaloide, a reported for the first time [4] and the desoxicordifolina [5]. The analysis of the crude hydroalcoholic extract and fractions by capillary electrophoresis demonstrated the abundant presence of the alkaloid dihidrocorinanteol less in the n-hexane fraction. All compounds isolated were characterized by IR spectroscopy, mass spectrometry, ESI-MS and ¹H NMR and ¹³C NMR spectra and two dimensional NMR spectroscopy. The crude hydroalcoholic extract, fractions and alkaloids were evaluated by testing antioxidants and inhibition of acetylcholinesterase. The antioxidant tests revealed low levels of flavonoids and phenolic compounds, demonstrating that there is no significant amounts of these compounds class in the chemical constitution in this specie. DPPH radical scavenging assay, as expected was not significant, confirming the previous results, but reducing power test was considered interesting, suggesting that the alkaloids can act as reducers by mechanisms other than of phenol compounds. It was observed an antagonistic effect of constituents present in the crude hydroalcoholic extract and fractions when tested for inhibition of acetylcholinesterase, since the results were lower than control, However, the alkaloid isolated from FRA: acetildihidrocorinanteol [3], N-oxide isositsiriquina [2a-b] and from fraction FrAq desoxicordifolina [5] the results were excellent, by inhibiting the enzyme by up to 100% at a concentration of 0.1 mg / mL , which is 500 times more potent than the control, Galanthamine, 80% inhibition at 50 mg / mL. These results demonstrate that the alkaloids obtained from E.leiocarpa are potential drugs for the treatment of inflammatory and anti-Alzheimer's disease.