Estratégias de indução do antígeno 503 recombinante de Leishmania i. chagasi expresso em Escherichia coli M15

• Main Author: Vasconcelos, Luan Tales Costa de Paiva
• Other Authors: 87510383404
• Language: Portuguese
• Published: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENGENHARIA QUÍMICA 2018
• Subjects: CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA; Antígeno 503; Escherichia coli recombinante; Leishmaniose; Indução
• Online Access: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/25672

Submitted by Automação e Estatística ([e-mail]) on 2018-08-01T21:41:21Z No. of bitstreams: 1 LuanTalesCostaDePaivaVasconcelos_DISSERT.pdf: 4667942 bytes, checksum: f1d92bcd962e6d65e62dd7943ddbeeca (MD5) === Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva ([e-mail]) on 2018-08-03T20:28:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LuanTalesCostaDePaivaVasconcelos_DISSERT.pdf: 4667942 bytes, checksum: f1d92bcd962e6d65e62dd7943ddbeeca (MD5) === Made available in DSpace on 2018-08-03T20:28:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LuanTalesCostaDePaivaVasconcelos_DISSERT.pdf: 4667942 bytes, checksum: f1d92bcd962e6d65e62dd7943ddbeeca (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 === Com cerca de 900.000 a 1,3 milhões de novos casos anualmente, a Leishmaniose é um complexo de doenças que pode ser fatal se não dada a devida atenção. Apesar de sua relevância na saúde pública, ainda não existe uma vacina capaz de prevenir a doença em humanos, e seu tratamento é caro e agressivo à saúde. O presente estudo tem como objetivo otimizar os parâmetros de indução do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi expresso em Escherichia coli recombinante. Dessa forma, para a indução foi utilizada a lactose nas concentrações de 0,1; 1,0 e 10 g/L, e o isopropil-β-D-tiogalactopiranosídeo (IPTG) nas concentrações de 20,0; 100,0; 500,0 e 1000,0 M como moléculas indutoras em diferentes densidades celulares (densidade óptica a 600 nm de 0,5 e 1,0) de modo a analisar a influência do instante de indução no rendimento da proteína de interesse. Os resultados mostraram que a concentração de IPTG de 100,0 M foi a que mais favoreceu a produção do antígeno (0,087 g/L), sendo esta concentração de IPTG 10 vezes menor do que utilizada em trabalhos anteriores para esse tipo de sistema, e para a lactose foi a de 1,0 g/L (0,016 g/L). Dessa forma, a indução com 100,0 M de IPTG permitiu obter o antígeno 503 com uma concentração 5,6 vezes maior que a máxima obtida quando a lactose foi usada como indutor. === With nearly 900,000 to 1.3 million new cases annually, Leishmaniosis is a complex of diseases that can be fatal if not given proper attention. Despite its relevance in the public health system, there is no vaccine capable of preventing disease in humans so far, and its treatment is expensive and aggressive to human health. Vaccination remains the most practical and realistic way of fight against the disease, thus, the production of recombinant antigens as a pathway towards a vaccine acquisition is necessary. In addition, the optimization of the strategy of the recombinant antigen’s production is of interest so it can make the process viable. Therefore, the present study aims to optimize the induction parameters of the 503 Leishmania i. chagasi antigen expressed in recombinant Escherichia coli. Hence, the induction at different cell densities (optical density at 600 nm of 0.5 and 1.0) was evaluated in order to analyse the influence of the induction time on the yield of the protein of interest. In this segment, lactose and isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside (IPTG) were used as inducer molecules, using various concentrations: 0.1 g/L, 1.0 g/L and 10 g/L for lactose and 20 μM, 100 μM, 500 μM and 1000 μM for IPTG. The results presented that the concentration of IPTG that obtained the higher antigen levels was that of 100 μM (0.087 g/L), a 10-fold lower concentration than was being previously used in this type of system, and for lactose it was 1 g/L (0.016 g/L). Thus, the induction with 100 μM allowed to obtain the antigen with a concentration 5.6 times higher than the lactose induction maximum concentration.