Inibidor de serinoproteinase obtido de sementes de Juquiri (Mimosa regnelli Benth.) com atividade anti-inflamatória, anticoagulante e adjuvante da heparina

• Main Author: Serquiz, Raphael Paschoal
• Other Authors: 41305655400
• Language: Portuguese
• Published: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA 2018
• Subjects: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA; Trombose; Neutrófilo; Macrófago; Tripsina; Quimotripsina; Elastas
• Online Access: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/25528

Submitted by Automação e Estatística ([e-mail]) on 2018-07-02T21:40:20Z No. of bitstreams: 1 RaphaelPaschoalSerquiz_DISSERT.pdf: 1610214 bytes, checksum: 8f23b4e10ee21479e603090f006e88c4 (MD5) === Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva ([e-mail]) on 2018-07-09T12:09:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RaphaelPaschoalSerquiz_DISSERT.pdf: 1610214 bytes, checksum: 8f23b4e10ee21479e603090f006e88c4 (MD5) === Made available in DSpace on 2018-07-09T12:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RaphaelPaschoalSerquiz_DISSERT.pdf: 1610214 bytes, checksum: 8f23b4e10ee21479e603090f006e88c4 (MD5) Previous issue date: 2017-10-25 === A hemostasia é o evento pelo qual os mamíferos bloqueiam a perda de volemias sanguíneas e promovem o reparo de lesões, e falhas por excessos contribuem para a propagação de fatores inflamatórios e trombóticos. As consequências da aterosclerose são exemplos de agravos desse tipo e a heparina (Hep) é um fármaco de escolha para esses tratamentos. Pacientes com carência de antitrombina têm resistência aos efeitos anticoagulantes da Hep, então pesquisas por novas moléculas homeostáticas que contribuam com os tratamentos clínicos são necessárias. Inibidores de proteinases vegetais têm sido eficazes em controlar processos biológicos, como coagulação e inflamação. O presente trabalho objetivou isolar um inibidor de tripsina da semente de Juquiri (JTI) verificando sua atividade contra serinoproteinases, e avaliar seus potenciais anticoagulante e anti-inflamatório. O inibidor foi isolado por cromatografia de afinidade e troca-iônica, apresentando duas principais bandas proteicas de 11,9 e 19,2 kDa estimadas por SDS-PAGE, e foi capaz de inibir tripsina e quimotripsina. Na coagulação, o JTI prolongou o tempo de tromboplastina parcial (APTT) em concentrações superiores à 2 µg/100 µL de plasma, sem prolongar o tempo de protrombina (PT). Associado à Hep, o JTI foi capaz de intensificar o efeito anticoagulante do fármaco em ambos os testes. Sem apresentar toxicidade contra eritrócitos humanos o JTI reduziu 40% das concentrações de elastase liberada por neutrófilos induzidos por PAF (fator ativador de plaquetas). O JTI em concentrações entre 20-80 µg/mL estimulou a produção de TNF por macrófagos RAW 264.7 em cultura sem provocar outros estímulos inflamatórios. Macrófagos ativados por LPS tiveram redução nas concentrações de NO, IL-6 e TNF quando tratados com JTI em concentrações entre 20-160 µg/mL. Estes dados apontam o JTI como promissor no tratamento de doenças trombóticas e inflamatórias, tendo sido eficaz como adjuvante da heparina e em promover a redução de estímulos inflamatórios de neutrófilos por vias provavelmente dependentes de MAPK, e em macrófagos por vias do fator de transcrição NF-κB. === Hemostasis is the event that mammals use to block the loss of blood and promote injury repair, and failure by overeating contributes to the spread of inflammatory and thrombotic factors. Atherosclerosis is an example of such diseases, and heparin (Hep) is a treatment drug. Patients with antithrombin deficiency have resistance to the anticoagulant effects of Hep, so researches for novel homeostatic molecules that contribute to clinical treatments are necessary. Plant protease inhibitors have been effective in controlling biological processes, such as coagulation and inflammation. The present work aimed isolate a trypsin inhibitor from the Juquiri (JTI) seed and evaluate its activity against serine proteases, and its anticoagulant and antiinflammatory potentials. JTI was isolated by affinity and ion exchange chromatography, presenting two major protein bands of 11.9 and 19.2 kDa on SDSPAGE, and was able to inhibit trypsin and chymotrypsin. In coagulation, JTI prolonged partial thromboplastin time (APTT) at concentrations greater than 2 μg/100 μL plasma, without prolonging prothrombin time (PT). Associated with Hep, JTI was able to enhance the anticoagulant effect of the drug in both tests. Without toxicity to human erythrocytes, JTI reduced 40% of elastase concentrations released by neutrophils induced by platelet activating factor (PAF). JTI at concentrations between 20-80 μg/mL stimulated TNF production by macrophages (RAW 264.7) in culture without provoking other inflammatory stimuli. LPS-activated macrophages had a reduction in NO, IL-6 and TNF productions when treated with JTI at 20-160 μg/mL concentrations. These data point to JTI as promising in the treatment of thrombotic and inflammatory diseases and have been effective as heparin adjuvant and to promote the reduction of neutrophil inflammatory stimuli likely by MAPK-dependent pathways and in macrophages by NF-κB transcription factor pathways.